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非洲豬瘟病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

簡要描述:非洲豬瘟病毒探針法熒光定量PCR試劑盒非洲豬瘟病毒(African Swine Fever Virus, ASFV)會引起非洲豬瘟等急性、出血性、烈性傳染病。

  • 更新時間:2024-07-18
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 生產(chǎn)地址:上海
  • 訪  問  量:261

詳細介紹

品牌YLKBIO貨號YLK10379P
規(guī)格50T供貨周期現(xiàn)貨
主要用途科研實驗應用領域化工,生物產(chǎn)業(yè)
英文名稱African Swine Fever Virus(ASFV) Probe PCR Kit保存條件低溫運輸,-20℃保存
有效期12個月試劑盒說明不同批號的試劑盒組分不可交互使用

非洲豬瘟病毒探針法熒光定量PCR試劑盒


商品名稱:非洲豬瘟病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

Name     :African Swine Fever Virus(ASFV) Probe PCR Kit

非洲豬瘟病毒(African Swine Fever Virus, ASFV)會引起非洲豬瘟等急性、出血性、烈性傳染病,其特征是發(fā)病過程短,最急性和急性感染死亡率高達100%,臨床表現(xiàn)為發(fā)熱(達40~42℃),心跳加快,呼吸困難,部分咳嗽,眼、鼻有漿液性或粘液性膿性分泌物,皮膚發(fā)紺,淋巴結(jié)、腎、胃腸粘膜明顯出血,非洲豬瘟臨床癥狀與豬瘟癥狀相似,只能依靠實驗室監(jiān)測確診,對養(yǎng)豬業(yè)造成嚴重損害,因此快速檢測非洲豬瘟病毒具有重要意義。熒光定量PCR是檢測傳染性疾病的主流技術,本產(chǎn)品就是以染料法熒光定量PCR技術為基礎開發(fā)的專門檢測非洲豬瘟病毒的試劑盒,它具有下列特點:

1.即開即用,用戶只需要提供樣品DNA模板。

2.引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。

3.提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。

4.特異性高,引物是根據(jù)非洲豬瘟病毒高度保守區(qū)設計,不會跟其他病毒的DNA發(fā)生交叉反應。

5.本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PCR反應。

6.本產(chǎn)品只能用于科研。


【試劑組成】

成分

十孔盒包裝

2×Probe qPCR MagicMix

0.5 mL(本色蓋)

熒光PCR專用模板稀釋液

1 mL(黃蓋)

非洲豬瘟病毒PCR引物

100 μL(白蓋)

非洲豬瘟病毒qPCR探針

100 μL(棕色管)

非洲豬瘟病毒陽性對照2.0

(1×10E8拷貝/μL)

50 μL(紅蓋)

核酸釋釋劑試用裝

50次(2.5mL

使用手冊

1

【儲存條件及有效期】

低溫運輸,-20℃保存,保存期限為 12 個月。


【自備試劑】樣品 DNA。


【使用方法】

一、稀釋標準曲線樣品(以10E2-10E7拷貝/μL610倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。

1.       標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2

2.      用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同)。

3.      7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

4.      換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

5.      換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

6.      重復上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

7.       如果有N個樣品,最好設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?span>10μL陽性對照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。

8.      用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA/提取試劑盒兼容。

三、Probe qPCR反應(20μL體系,在樣品制備室進行)

9.      如果只做1次重復,則標記N+9PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于標準曲線樣品。

在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽

10.       性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后最后加):

成分

樣品管

N+2

PCR陰性對照管

標準曲線

樣品管(2-7管)

2×Probe qPCR   MagicMix

10 μL

10 μL

10 μL

非洲豬瘟病毒 qPCR探針

2 μL

2 μL

2 μL

非洲豬瘟病毒 PCR引物混合液

2 μL

2 μL

2 μL

 待測樣品DNA模板

6 μL

不加

不加

7步所得標準曲線樣品稀釋液(2-7號)

不加

不加

6μL2號樣到2號管,3號樣到3號管










11.     蓋上蓋子后上機,按下面參數(shù)進行PCR:

過程

溫度

時間

預變性

94℃

5 min

PCR反應

40個循環(huán))

94℃

0.5 min

55

0.5 min(采集FAM通道的熒光信號)

72

0.5 min

最后延伸

72℃

10    min

四、數(shù)據(jù)處理

12.      如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品DNA濃度的log值,再推算出其濃度。

       13.    如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照Ct必須大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴增曲線,Ct值應該小于或等于30。對待測樣品,如果其Ct大于或等于40則為陰性,如果小于或等于35則為陽性。如果在35-40之間,則重復一次。重復實驗的Ct值如果大于或等于40則為陰性,如果小于40,則為陽性。

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