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立克次氏體通用探針法熒光定量PCR試劑盒

簡要描述:立克次氏體通用探針法熒光定量PCR試劑盒立克次氏體(Rickettsia)為革蘭氏陰性菌,是一類專性寄生于真核細胞內(nèi)的 G原核生物。是介于細菌與病毒之間,而接近于細菌的一類原核生物。

  • 更新時間:2024-07-18
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 生產(chǎn)地址:上海
  • 訪  問  量:253

詳細介紹

品牌YLKBIO貨號YLK10378P
規(guī)格50T供貨周期現(xiàn)貨
主要用途科研實驗應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè)
英文名稱Rickettsia spp. Probe qPCR Kit保存條件低溫運輸,-20℃保存
有效期12個月試劑盒說明不同批號的試劑盒組分不可交互使用

立克次氏體通用探針法熒光定量PCR試劑盒


商品名稱:立克次氏體通用探針法熒光定量PCR試劑盒

Name     :Rickettsia spp. Probe qPCR Kit

立克次氏體(Rickettsia)為革蘭氏陰性菌,是一類專性寄生于真核細胞內(nèi)的 G原核生物。是介于細菌與病毒之間,而接近于細菌的一類原核生物。一般呈球狀或桿狀,是專性細胞內(nèi)寄生物,主要寄生于節(jié)肢動物,有的會通過蚤、虱、蜱、螨傳入人體、如斑疹傷寒、戰(zhàn)壕熱。本產(chǎn)品就是以探針法熒光定量 PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測立克次氏體的試劑盒,它具有下列特點:

1. 即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。

3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 特異性高,引物是根據(jù)立克次氏體通用高度保守區(qū)設(shè)計。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應(yīng)。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研。


【試劑組成】

 

五孔盒包裝

2×Probe qPCR MagicMix

500μL(本色蓋)

熒光 PCR 專用模板稀釋液

1mL(黃蓋)

立克次氏體探針法

qPCR引物-探針混合液

150μL(棕色管)

立克次氏體qPCR 陽性對照(1×10E7 拷貝/μL)

50μL(黃蓋)

使用手冊

1

【儲存條件及有效期】

低溫運輸,-20℃保存,保存期限為 12 個月。


【自備試劑】樣品 DNA。


【使用方法】

一、稀釋PCR 陽性對照(以10E1-10E6 拷貝/μL 610倍稀釋度為例)

如果做定性實驗,則此步可以跳過。如果做定量實驗,則需要稀釋陽性對照做標(biāo)準(zhǔn)曲線。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。本產(chǎn)品只提供 DNA 片段作為陽性對照。

1.  標(biāo)記 6 個離心管,分別為 6,54,3,2,1。

2.         用帶芯槍頭分別加入 45μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(最好用帶芯槍頭,下同)。

3.         6 號管中加入 5μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供,充分震蕩 1 分鐘, 得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4.         換槍頭,在 5 號管中加入 5μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5.         換槍頭,在 4 號管中加入 5μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E4 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6.         重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上用。

二、樣品 DNA 的制備

7.         如果有 N 個樣品,必須設(shè)置 N+2 個提取,多出的一個是樣品制備 PC(樣品制備陽性對照),一個是樣品制備 NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?span> 10μL 陽性對照的 10000 倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為樣品制備 PC。另外用水作為樣品制備 NC。

8.         用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù) DNA/提取試劑盒兼容。

二、Probe qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進行)

9.         如果做定量分析并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記 N+9個PCR 管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1個用于PCR陰性對照(用水做模板),1個用于 PCR 陽性對照(用第4號管中的陽性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為描述操作步驟,

在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè) 置陽性對照,并且陽性對照樣

10.         品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后最后加):

成分

樣品管

N+2

PCR 陰性對照管

標(biāo)準(zhǔn)曲線

樣品管1-6

2×Probe qPCR MagicMix

10μL

10μL

各 10μL

立克次氏體探針法qPCR 引物混合液-探針混合液

3μL

3μL

各 3μL

N+2 個待測 DNA模板

7μL

不加

不加

超純水

不加

7μL

不加

第 6 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液(1-6 號)

 

不加

 

不加

各7μL1 號樣到1 號管,2 號樣到2   號管…)













11.        蓋上蓋子后上機,按下面參數(shù)進行 PCR:

過程

溫度

時間

預(yù)變性

95℃

5min

qPCR 反應(yīng)

(40 個循環(huán))

95℃

15sec

60℃

1min(采集 FAM 通道的熒光信號)

四、數(shù)據(jù)處理

12.         如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

     13.    如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴增曲線,Ct 值應(yīng)該小于或等于 35。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實驗的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 40,則為陽性。

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