土壤總磷/有機磷/無機磷含量測定試劑盒說明書
微量法 100T/96S
注 意 :正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
土壤總磷包括有機磷和無機磷,其中無機磷能夠直接被植物利用。土壤有機磷經(jīng)過礦化分解而轉(zhuǎn)化為無機磷。同時測定土壤總磷、有機磷和無機磷,可以全面反映土壤磷營養(yǎng)狀況。
測定原理:
利用鉬藍(lán)法定磷。取一份土樣,通過浸提法測定土壤無機磷含量;另外取一份土樣,經(jīng)高溫灼燒后,土壤有機磷轉(zhuǎn)化為無機磷,測得土壤總磷含量;總磷含量減去無機磷含量,即可計算出有機磷含量。
自備儀器和用品:
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、臺式離心機、可調(diào)式水浴鍋,分析天平、可調(diào)式移液器、550℃高溫電爐、蒸餾水、100目篩子(可更小)。
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。臨用前用蒸餾水稀釋10倍后再用。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前配制,加入8mL蒸餾水,充分溶解后加入4mL試劑二,混勻。
標(biāo)準(zhǔn)品:液體×1支,20 μmol/L無機磷標(biāo)準(zhǔn)品,4℃保存。
土壤不同形態(tài)磷提取:
1.無機磷:稱取通過100目篩子的風(fēng)干土樣0.01g,轉(zhuǎn)移到1mL離心管,加入1mL試劑一,震蕩混勻,然后置于45℃水浴1h,8000g,25℃離心10min,取上清液一,用于無機磷含量測定。
2.總磷提取:取通過100目篩子的風(fēng)干土樣,550℃灼燒1h,冷卻后稱取約0.01g,轉(zhuǎn)移到1 mL離心管,加入1mL試劑一,震蕩混勻,然后置于45℃水浴1h,8000g,25℃離心10min,取上清液二,用于總磷含量測定。
測定步驟:
1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長到660 nm,蒸餾水調(diào)零。
2.打開水浴鍋,調(diào)節(jié)溫度到40℃。
3. 空白管:取EP管,依次加入100μL蒸餾水,100μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度,記為A空白管。
4. 標(biāo)準(zhǔn)管:取EP管,依次加入10μL標(biāo)準(zhǔn)液,90μL蒸餾水,100μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
5. 測定管:取EP管,依次加入10μL上清液一或者上清液二,90μL蒸餾水,100μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度,記為A測定管。
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。
土壤磷含量計算:
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1.土壤無機磷含量(μmol /g 干重)=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定-A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)]×V總÷W
=0.02×(A測定-A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)÷W
C標(biāo)準(zhǔn)液:20 μmol/L; W:土壤樣品質(zhì)量,g; V總:上清液一總體積,1 mL=0.001 L。
2.土壤總磷含量(μmol /g 干重)=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定-A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)]×V總÷W
=0.02×(A測定-A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)÷W
C標(biāo)準(zhǔn)液:20 μmol/L;W:土壤樣品質(zhì)量,g;V總:上清液二總體積,1mL=0.001 L。
3.土壤有機磷(μmol /g干重)=土壤總磷-土壤無機磷
4.
b. 使用96孔板測定的計算公式如下
1.土壤無機磷含量(μmol /g 干重)=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定-A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)]×V總÷W
=0.02×(A測定-A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)÷W
C標(biāo)準(zhǔn)液:20 μmol/L; W:土壤樣品質(zhì)量,g; V總:上清液一總體積,1 mL=0.001 L。2. 土壤總磷含量(μmol /g 干重)=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定-A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)]×V總÷W
=0.02×(A測定-A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)÷W
C標(biāo)準(zhǔn)液:20 μmol/L;W:土壤樣品質(zhì)量,g;V總:上清液二總體積,1mL=0.001 L。
3.土壤有機磷(μmol /g 干重)=土壤總磷-土壤無機磷
注意事項:
試劑三配制過程中,可能會產(chǎn)生黑色固體,其不影響結(jié)果,注意吸取時不要將黑色固體吸入。
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