土壤芳基硫酸酯酶(Solid-aryl sulfatase,S-ASF)試劑盒說明書
微量法100管/48樣
注 意 :正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
土壤芳基硫酸酯酶來自于土壤微生物,能酶促土壤有機(jī)硫化物轉(zhuǎn)化為植物可吸收的無機(jī)態(tài)硫,在硫素的生物化學(xué)循環(huán)和植物的硫營養(yǎng)代謝中具有重要的作用,是反映土壤質(zhì)量的一個(gè)重要生物學(xué)指標(biāo)。
測(cè)定原理:
S-ASF能夠催化對(duì)-硝基苯硫酸鉀生成對(duì)-硝基苯酚,后者在410nm有特征光吸收。
自備用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:甲苯5mL×1瓶,4℃保存(自備);
試劑二:液體20mL×1瓶,4℃保存;
試劑三:粉劑×2支,-20℃保存;臨用前加入1.25mL蒸餾水,充分溶解備用,用不完的試劑仍-20℃保存;
試劑四:液體5mL×1瓶,4℃保存;
試劑五:液體20mL×1瓶,4℃保存;
樣品處理:
新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干,過30~50目篩。
測(cè)定步驟:
試劑名稱 | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
風(fēng)干土樣(g) | 0.05 | 0.05 |
試劑一(μL) | 12.5 | 12.5 |
振蕩混勻,使土樣全部濕潤,室溫放置15min
試劑二(μL) | 200 | 200 |
試劑三(μL) | 50 | |
蒸餾水(μL) | 50 |
混勻, 37℃水浴1h后
試劑四(μL) | 50 | 50 |
試劑五(μL) | 200 | 200 |
充分混勻,室溫靜置2min后,10000g 25℃離心10min,取200μL上清液于410nm處測(cè)定吸光值A,計(jì)算
ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
S-ASF活力計(jì)算:
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.0066x -0.013;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/L),y為吸光值。
單位的定義:每天每g土樣中產(chǎn)生1 μmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。
S-ASF活力(μmol/d /g 土樣)= (ΔA+0.013) ÷0.0066×V反總÷W÷T =19.09×(ΔA+0.013)
T:反應(yīng)時(shí)間,1h=1/24d;V反總:反應(yīng)體系總體積:2.625×10-4 L;W:樣本質(zhì)量,0.05g。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.0033x -0.013;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/L),y為吸光值。
單位的定義:每天每g土樣中產(chǎn)生1 μmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。
S-ASF活力(μmol/d /g 土樣)= (ΔA+0.013) ÷0.0033×V反總÷W÷T =38.19×(ΔA+0.013)
T:反應(yīng)時(shí)間,1h=1/24d; V反總:反應(yīng)體系總體積:2.625×10-4 L;W:樣本質(zhì)量,0.05g。
電話
微信掃一掃