土壤汞(S-Hg)濃度檢測試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意 :正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
土壤汞污染能夠通過食物鏈傳遞和富集,對植物、動物和人類健康產(chǎn)生威脅。礦山開發(fā)、工業(yè)加工、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和生活垃圾常常造成土壤汞污染,因此評價和防止土壤重金屬污染常常需要測定土壤汞含量。
測定原理:
土壤經(jīng)消化后,汞以Hg2+離子形式存在;Hg2+能與二硫腙生成橙色絡(luò)合物,溶于三氯jia烷后,在490nm測定吸光度,即可計算S-Hg含量。
自備儀器和用品:
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋、可調(diào)式移液槍、100目篩(可更?。饬蛩?、濃鹽酸、濃硝酸、三氯jia烷和蒸餾水。
試劑組成和配制:
標(biāo)準(zhǔn)品:液體×1支,4nmol/mL Hg標(biāo)準(zhǔn)液,4℃保存。
試劑一:自備。在該試劑瓶中加入52mL蒸餾水,36 mL濃鹽酸,12mL濃硝酸,混勻,4℃避光保存。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加18.4 mL蒸餾水充分溶解。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加3 mL蒸餾水充分溶解。
試劑四:粉劑×1支,4℃保存。臨用前加1.5 mL蒸餾水充分溶解。
試劑五:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加5.2 mL蒸餾水充分溶解。
試劑六:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加20 mL三氯jia烷充分溶解。
S-Hg檢測:
1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,體積波長到490 nm,三氯jia烷調(diào)零。
2. 樣品管:風(fēng)干的土壤,過100目篩后精確稱取0.1 g左右,裝入EP管;加入1 mL試劑一,充分混勻后沸水浴消化60 min。取出冷卻后室溫8000g離心10min,吸取20 μL上清液加入新的EP管;再先后加入180 μL蒸餾水和20 μL濃硫酸,混勻;最后加入180 μL試劑二,混勻后40℃水浴24h,期間震蕩數(shù)次。
2. 標(biāo)準(zhǔn)管:取EP管,加入20 μL標(biāo)準(zhǔn)液,180 μL蒸餾水和20 μL濃硫酸,混勻;最后加入180 μL試劑二,混勻后40℃水浴24h,期間震蕩數(shù)次。
3. 加入20 μL試劑三,震蕩直到無色;開蓋靜置30min,期間搖蕩數(shù)次,以排出氣體。
4. 加入10 μL試劑四,充分混勻后靜置5min;加入50μL試劑五,蓋緊后震蕩至少1min,靜置10min以分層。
5. 小心吸取20 μL下層溶液,加入200 μL試劑六,震蕩使無色,靜置10 min以分層。
6. 小心吸取140 μL下層溶液,加入微量玻璃比色皿/96孔板,于490nm處比色,記錄各管吸光值。記為A樣品管和A標(biāo)準(zhǔn)管。
注意:標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。
S-Hg濃度計算公式:
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
Hg(nmol Hg/g 干重)=[C標(biāo)×(A測定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管)]×V總÷V樣÷W
=200×(A測定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管)÷W
C標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)液濃度,4 nmol/mL Hg;V總:上清液總體積,1 mL;W:土樣質(zhì)量,g;V樣:加入上清液體積,20 μL=0.02 mL。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
Hg(nmol Hg/g干重)=[C標(biāo)×(A測定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管)]×V總÷V樣÷W
=200×(A測定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管)÷W
C標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)液濃度,4 nmol/mL Hg;V總:上清液總體積,1 mL;W:土樣質(zhì)量,g;V樣:加入上清液體積,20 μL=0.02 mL。
注意事項:
1、試劑一有刺激性氣味,易揮發(fā),實驗過程中應(yīng)注意佩戴口罩和手套,使用完立即蓋好蓋子,以免試劑不夠;
2、測定過程中需加入濃硫酸,加濃硫酸時需注意,避免濺到皮膚或眼睛上;
3、靜置分層后,用1mL移液槍,排除空氣后,輕輕插入下層溶液中,緩慢吸取下層溶液。
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