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土壤多酚氧化酶(Solid-Polyphenol oxidase,S-PPO)試劑盒說(shuō)明書(shū)

發(fā)布時(shí)間:2023/9/21      點(diǎn)擊次數(shù):242

土壤多酚氧化酶(Solid-Polyphenol oxidase,S-PPO)試劑盒說(shuō)明書(shū)

                                          微量法 100管/96樣

 

注   意 :正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義:                           

S-PPO主要來(lái)源于土壤微生物、植物根系分泌物及動(dòng)植物殘?bào)w分解釋放,催化土壤中芳香族化合物氧化成醌,醌與土壤中蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、礦物等物質(zhì)反應(yīng)生成有機(jī)質(zhì)和色素,完成土壤芳香族化合物循環(huán),用于土壤環(huán)境修復(fù)。

 

測(cè)定原理:

S-PPO能夠催化鄰苯三酚產(chǎn)生有色物質(zhì),后者在430nm有特征光吸收。

 

自備用品:

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、yi醚50mL(不允許快遞)和蒸餾水。

 

試劑組成和配制:

試劑一:粉劑×2瓶,4℃保存;臨用前取一瓶,加入7mL蒸餾水充分溶解后待用;用不完的試劑4℃保存一周。

試劑二:液體6mL×1瓶,4℃保存;

試劑三:yi醚50mL×1瓶,4℃保存;(自備)

 

樣品處理:

新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干,過(guò)30~50目篩。

 

測(cè)定步驟:

 

1、   分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至430nm,蒸餾水調(diào)零。

2、  加樣表

試劑名稱

測(cè)定管

風(fēng)干土樣(g)

0.02

試劑一(μL)

120

振蕩混勻,30℃恒溫培養(yǎng)1 h

試劑二(μL)

50

試劑三(μL)

430

振蕩數(shù)次,室溫靜置30min,取200μL上層液于430nm處測(cè)定吸光值A(chǔ)。

(注意:1、因yi醚粘度小,易掉液,吸取前需先將槍頭在上層液里潤(rùn)洗2~3次,再轉(zhuǎn)移測(cè)定;2、yi醚易揮發(fā),轉(zhuǎn)移到96孔板后立即測(cè)定,最好一個(gè)一個(gè)測(cè)定)。

 

S-PPO活力計(jì)算

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 8.97x -0.003;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為吸光值A(chǔ)。

單位的定義:每天每g土樣中產(chǎn)生1mg 紫色沒(méi)食子素定義為一個(gè)酶活力單位。

 

S-PPO活力(mg /d/g 土樣)=(A+0.003) ÷8.97×V反總÷W÷T=80×(A+0.003)

T:反應(yīng)時(shí)間,1h=1/24d; V反總:反應(yīng)體系總體積0.6mL;W:樣本質(zhì)量,0.02g。

 

b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 4.485x -0.003;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為吸光值A(chǔ)。

單位的定義:每天每g土樣中產(chǎn)生1mg 紫色沒(méi)食子素定義為一個(gè)酶活力單位。

S-PPO活力(mg/d/g 土樣)=(A+0.003) ÷4.485×V反總÷W÷T=160×(A+0.003)

T:反應(yīng)時(shí)間,1h=1/24d; V反總:反應(yīng)體系總體積0.6mL;W:樣本質(zhì)量,0.02g。



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