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土壤淀粉酶(Soil Amylase,S-AL)試劑盒說明書

發(fā)布時間:2023/9/21      點擊次數(shù):252

土壤淀粉酶(Soil Amylase,S-AL)試劑盒說明書

微量法100T/48S

 

注    意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義:

淀粉酶(EC3.2.1.1)是催化淀粉水解的一類酶的總稱。土壤中的淀粉酶主要來自于微生物,是一種重要的酶制劑,廣泛應(yīng)用于糧食加工、食品、釀造、發(fā)酵、紡織品工業(yè)和醫(yī)藥行業(yè)。

 

測定原理:

淀粉酶水解淀粉產(chǎn)生還原糖,可與3,5-二硝基水楊酸反應(yīng)生成紅棕色物質(zhì),在508nm處有特征吸收峰,顏色深淺在一定范圍內(nèi)與還原糖量成正比。

 

需自備的儀器和用品:

天平、水浴鍋、低溫離心機、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、甲苯。

 

試劑的組成和配制:

試劑一:液體10mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體4mL×1瓶,4℃保存。若出現(xiàn)沉淀析出,需70℃加熱溶解后再用。

試劑三:液體12mL×1瓶,4℃保存。

 

測定操作表:

 


對照管

測定管

土樣(g)

0.02

0.02

甲苯(μL)

10

10

25℃靜置15min

試劑一(μL)

110

50

試劑二(μL)


60

充分混勻,37℃震蕩1h,8000rpm,25℃,離心10min

上清液(μL)

100

100

試劑三(μL)

100

100

充分混勻,90℃水浴5min,待冷卻后,于微量石英比色皿/96孔板中測定508nm吸光值,分別記為A對照管和A測定管,△A=A測定管-A對照管。

 

計算公式:

a.        用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.2525x - 0.034,R2 = 0.9917

酶活單位定義:每g土樣每天催化生成1mg還原糖為一個酶活力單位。

S-AL(mg/d /g 鮮重)=(△A +0.034)÷ 0.2525×V反總÷W÷T

 

= 10.464×(△A +0.034)÷W

V反總:反應(yīng)體系總體積,0.11mL;T:反應(yīng)時間,1/24d;W:樣本質(zhì)量,g。

 

b.用96孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.1263x - 0.034,R2 = 0.9917

酶活單位定義:每g土樣每天催化生成1mg還原糖為一個酶活力單位。

S-AL(mg/d/g)=(△A +0.034)÷ 0.1263×V反總÷W÷T

=20.928×(△A +0.034)÷W

V反總:反應(yīng)體系總體積,0.11mL;T:反應(yīng)時間,1/24d; W:樣本質(zhì)量,g。



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