果糖(fructose ,FT)含量試劑盒說明書
微量法100管/96樣
注 意 :正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
果糖是一種最為常見的己酮糖,是葡萄糖的同分異構(gòu)體,以游離狀態(tài)大量存在于水果的漿汁和蜂蜜中,能與葡萄糖結(jié)合生成蔗糖。果糖是最甜的單糖,廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、保健品生產(chǎn)中。
測定原理:
果糖與間苯二酚反應(yīng),生成有色物質(zhì),在480nm下有特征吸收峰。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、蒸餾水
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100ml×1瓶,4℃保存;
試劑一:1mg/mL標準液10mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:液體 25ml×1瓶,4℃保存;
試劑三:液體 8ml×1瓶, 4℃避光保存;
試劑四:粉劑0.5g×1瓶,常溫保存。
果糖提?。?/span>
稱取0.1~0.2g樣本,常溫研碎;加入0.5mL提取液,適當(dāng)研磨后快速轉(zhuǎn)移到有蓋離心管中;置于80℃水浴鍋中10min(蓋緊,以防止水分散失),振蕩3~5次,冷卻后,4000g,25℃離心10min,取上清;加入少量(約2mg)試劑四,80℃脫色30min(蓋緊,以防止水分散失);再加入0.5mL提取液,4000g,25℃離心10min,取上清液測定。
測定步驟:
分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至480nm,蒸餾水調(diào)零。
1、 樣本測定,(在EP管中依次加入下列試劑):
試劑(μL) | 空白管 | 標準管 | 測定管 |
樣本 | 30 | ||
試劑一 | 30 | ||
蒸餾水 | 30 | ||
試劑二 | 210 | 210 | 210 |
試劑三 | 60 | 60 | 60 |
混勻,95℃水浴反應(yīng)30min(蓋緊,以防止水分散失),冷卻后取200μL至微量石英比色皿或96孔板中測定480nm處光吸收值,空白管、標準管和測定管分別記為A1、A2和A3??瞻坠芎蜆藴使苤灰鲆还?。
果糖含量計算:
1、果糖含量(mg/mg prot)=(C標準管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)= (A3-A1)÷(A2-A1) ÷Cpr
此法需要自行測定蛋白濃度。
2、果糖含量(mg/g鮮重)=(C標準管×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(W×V1÷V2)= (A3-A1) ÷(A2-A1) ÷W。
C標準管:標準管濃度,1mg/mL;V1:加入樣本體積,0.03mL;V2:加入提取液體積,1mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。
注意:Z低檢測限為100ng/g鮮重或1ng/mg prot
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