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食品中亞硝酸鹽含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

發(fā)布時(shí)間:2023/4/6      點(diǎn)擊次數(shù):312

食品中亞硝酸鹽含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

                                                     微量法100T/96S

   意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義:

在食品中,亞硝酸鹽可與肉品中的肌紅素結(jié)合而更安定,在食品加工業(yè)中作為保色劑,以維持肉制品的良好外觀,并防止肉毒梭狀芽孢桿菌的產(chǎn)生,提高食用肉制品的安全,但是人體長(zhǎng)期攝入亞硝酸鹽過(guò)量的食品,可誘發(fā)消化系統(tǒng)癌變。

測(cè)定原理:

在酸性條件下,亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸反應(yīng)生成重氮化合物,再與N-1-萘基乙二胺形成紫紅色偶氮化合物,在540nm處有特征吸收峰。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

天平、研缽或勻漿器、水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。

試劑組成和配制:

提取液一:液體50 mL×1瓶,室溫保存。

提取液二:液體50 mL×1瓶,室溫保存。

提取液三:液體50 mL×1瓶,室溫保存。

粉劑四:粉劑 100 mg ×1支,室溫保存。

試劑一:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。

樣品處理:

稱取樣品約0.2g鮮重或0.05g干重,破碎,加入0.5 mL 提取液一,沸水浴15min,冷卻至室溫,加入0.5 mL提取液二,震蕩搖勻,加0.5 mL 提取液三,用鑷子加少量粉劑四(約1 mg),靜置30min,25℃,8000g離心15 min,取上清液待測(cè)。

測(cè)定步驟和操作表:

1、   分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540nm,蒸餾水調(diào)零。

2、   操作表


測(cè)定管

空白管

蒸餾水(µL


70

樣品(µL

70


試劑一(µL

65

65

試劑二(µL

65

65

混勻,25℃靜置15min,于微量石英比色皿/96孔板中檢測(cè)540nm處吸光值A。  

A=A測(cè)定 - A空白

注意:空白管只需測(cè)定一次。

亞硝酸鹽含量計(jì)算:

a.        用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為:y=0.234x + 0.0002,R2= 0. 999  x為標(biāo)準(zhǔn)品亞硝酸鈉濃度(μg/ml y為吸光值A。

NO2-(μg/g=(△A-0.0002÷0.234×V÷V÷V樣總×W×0.6668

                    =A – 0.086÷0.234×1.5×0.6668÷W

                    =4.27×(△A-0.0002÷W

V樣總:加入提取液體積,1.5 mL; V樣:反應(yīng)中樣品體積,0.07mL;W:樣品質(zhì)量,g。

b.96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為:y=0.141x +0.095,R2= 0. 9991  x為標(biāo)準(zhǔn)品亞硝酸鈉濃度(μg/ml y為吸光值A。

NO2-(μg/g =(△A-0.0002÷0.141×V÷V÷V樣總×W×0.6668

                   =(△A-0.0002÷0.141×1.5×0.6668÷W

                   =7.09×(△A-0.0002÷W

V樣總:加入提取液體積,1.5 mL V樣:反應(yīng)中樣品體積,0.07mL;W:樣品質(zhì)量,g。

注意事項(xiàng):

1.        試劑盒2-8保存。

2.        試劑對(duì)人體有一定的危害,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服,戴手套操作。

3.        若檢測(cè)出得OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍外,請(qǐng)將樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)臐饪s或稀釋(A540 <0.09濃縮,A540 > 1.5 適當(dāng)稀釋)。

4.        Z低檢出限為0.5μg/g。



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