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鴿源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒

簡要描述:鴿源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒可用于檢測食品或其他材料中是否有鴿的成分。本產(chǎn)品只能用于科研,足夠 50 次 20μL 體系的熒光定量 PCR。

  • 更新時間:2024-07-18
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 生產(chǎn)地址:上海
  • 訪  問  量:264

詳細介紹

品牌YLKBIO貨號YLK10383P
規(guī)格50T供貨周期現(xiàn)貨
主要用途科研實驗應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè)
保存條件低溫運輸,-20℃保存有效期12個月
試劑盒說明不同批號的試劑盒組分不可交互使用

鴿源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒


商品名稱:鴿源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒

本試劑盒可用于檢測食品或其他材料中是否有鴿的成分?,F(xiàn)代食品加工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性,因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術(shù)已經(jīng)無法對食材的真?zhèn)芜M行準確的鑒定。同時部分食材還有致敏性,因此基于基因檢測的快速靈敏的食材來源檢測技術(shù)將對食品監(jiān)管和安全提供重要的保障。本產(chǎn)品就是為滿足這一需求根據(jù) PCR 原理開發(fā)的產(chǎn)品,它具有下列特點:

1.   即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA。

2.   根據(jù)鴿子16S rDNA基因保守區(qū)設(shè)計引物,能專一性地檢測出樣品中的鴿源成分,但不能檢測其他非鴿源的成分。

3.   熒光定量 PCR 檢測,比常規(guī) PCR靈敏10-100倍。

4.   快速,整個檢測過程(按一個樣品計)所需時間僅為 2.0 小時。

5.   一管式閉管操作,降低了交叉污染。

6.   提供陽性標準品,便于分析實驗結(jié)果。

7.   對混合樣品中鴿源成分的檢測下限為 0.001%,對樣品中鴿源成分的核酸檢測下限為 0.1ng/μL。

8.   本產(chǎn)品只能用于科研,足夠 50 次 20μL 體系的熒光定量 PCR。


【試劑組成】

成分

十孔盒包裝

2×qPCR MagicMix

0.5 mL(棕色

熒光PCR 專用模板稀釋液

1 mL(黃蓋)

鴿源性成分 PCR 引物混合液

100 μL(白蓋)

鴿源性成分 PCR 陽性對照

1×10E8拷貝/μL

50 μL(黃蓋)

DNA 釋放劑試用裝

50 次(成分見下)

DNA 提取試劑溶液 A 成分一

50 μL(白蓋)

DNA 提取試劑溶液 A 成分二

100 μL(綠蓋)

DNA 提取試劑溶液 B

400 μL(紅蓋)

使用手冊

1 份






【儲存條件及有效期】

低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時,由于其濃度較高,一定要注意不要污染其他試劑和成分。最好在專門的區(qū)域操作。


【自備試劑】DNA 模板


【使用方法】

一、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。

1.  標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

2.  用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同)。

3.  在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

4.  換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

5.  換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

6.  重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7.  用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。

8.  如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。如果用本試劑盒自帶的DNA釋放劑試用裝。則按下面步驟操作:

9.  配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液(足夠 10 個樣品)為例:在一干凈塑料管中加入 10

μL 溶液 A 成分一,20μL 溶液 A 成分二和 970μL 超純水,充分混合均勻即可。溶液 A 工作液可室溫放置,但最好在一周內(nèi)用完,不要長期放置。一次檢測一個樣品需要 100μL 溶液 A 工作液,1mL 工作液足夠 10 個樣品。如果待測樣品數(shù)量為其他數(shù)字,配制的溶液 A 工作液的體積需要做相應(yīng)的調(diào)整。

10.  在標記好的 N+2 個離心管中,加入 1-5mg 固體樣品(半粒芝麻大?。┗?5μL 液體樣品待測樣品。在樣品制備陽性對照中加入 5μL 陽性對照,在樣品制備陰性對照中加入 5μL 水。

11.  在每個管中加入 100 μL 溶液 A 工作液,確保固體樣品被溶液淹埋,如果是液體樣品則震蕩混勻。

12.  95℃保溫 10 分鐘。

13.  待冷卻到常溫后加入 10μL 溶液 B 并混勻得 DNA 釋放液。每個樣品得到的 DNA

釋放液足夠進行 50-100 次 PCR。

三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進行)

14.  如果只做 1 次重復(fù),則標記 N+9 個PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于PCR 陰性對照,6 個用于標準曲線樣品(也充當 PCR 陽性對照)。如果做 2-3 次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加 2 或 3 倍。

15.  在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后最后加):

成分

樣品管

N+2 個

PCR 陰性

對照管

標準曲線

樣品管(2-7 管)

2×qPCR MagicMix

(棕色管)

各10μL

10μL

各10μL

鴿源性成分PCR引物混合液(白蓋)

各2μL

2μL

各2μL

自備 10×ROX (見注)

各2μL

2μL

各2μL

N+2待測樣品DNA模板

各6μL

不加

不加

1步所得標準曲線樣品稀釋液(2-7 號)

不加

不加

各6μL(2號樣到2   號管,3號樣到3號管…)

注:僅 ABI7500、7700 和  7900 儀器需要使用ROX 作為對照,其他熒光 PCR 儀器(如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480)不需要使用 ROX,則用水替代。

16.  蓋上蓋子后上機,按下面參數(shù)進行 qPCR(具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù) qPCR 儀器的不同而自行優(yōu)化)。

四、qPCR 反應(yīng)參數(shù)

過程

溫度

時間

預(yù)變性

94℃

5 min

PCR 反應(yīng)

40 個循環(huán))

94℃

30 sec

60

30 sec(采集 FAM通道的熒光信號


五、數(shù)據(jù)處理

17. 以陽性對照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct值從標準曲線上推算出樣品 DNA 濃度的log值,再推算出其濃度。

18.如果把試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照Ct必須大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴增曲線,Ct值應(yīng)該小于或等于30。對待測樣品,如果其Ct大于或等于40則為陰性,如果小于或等于35則為陽性。如果在35-40之間。則重復(fù)一次。重復(fù)試驗的Ct值如果大于或等于40則為陰性,如果小于40,則為陽性。

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