簡(jiǎn)要描述:副流感病毒通用探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒艱難梭狀芽孢桿菌(Clostridium difficile)屬厭氧性細(xì)菌,一般寄生在人的腸道內(nèi)。
詳細(xì)介紹
品牌 | YLKBIO | 貨號(hào) | YLK10381P |
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規(guī)格 | 50T | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 科研實(shí)驗(yàn) | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
保存條件 | 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 | 有效期 | 12個(gè)月 |
試劑盒說(shuō)明 | 不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用 |
副流感病毒通用探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒
商品名稱:副流感病毒通用探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒
副流感病毒是常常引起兒童下呼吸道感染的一種病毒,其致病性僅次于呼吸道合胞病毒 (RSV)。與RSV一樣,人類副流感病毒可以造成反復(fù)發(fā)作的上呼吸道感染(如感冒和喉嚨痛)。它也能造成嚴(yán)重的反復(fù)感染的下呼吸道疾?。ㄈ绶? 炎,支氣管炎和細(xì)支氣管炎),特別是在老年人中和有免疫缺陷人群中。因此快速靈敏診斷具有重要意義。本產(chǎn)品就是以探針?lè)晒舛?RT-PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)的專門檢測(cè)副流感病毒的試劑盒,它具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶只需要提供樣品 RNA 模板。
2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)副流感病毒高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他病毒的 RNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針?lè)晒舛?RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
【試劑組成】
成分 | 包裝 |
2×Probe qPCR MagicMix | 500μL(本色蓋) |
熒光 PCR 專用模板稀釋液 | 1 mL(黃蓋) |
副流感病毒通用探針?lè)?qRT-PCR 引物混合液 | 100 μL(白蓋) |
副流感病毒通用 qRT-PCR 探針 | 50 μL(棕色管) |
副流感病毒通用探針?lè)?qRT-PCR 陽(yáng)性對(duì)照(1×10E8 拷貝/μL) | 50 μL(黃蓋) |
核酸釋釋劑(試用裝) | 20 次(1mL,綠蓋) |
使用手冊(cè) | 1 份 |
【儲(chǔ)存條件及有效期】
低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為 12 個(gè)月。
【自備試劑】樣品 DNA。
【使用方法】
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。
1. 由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原, 本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供無(wú)傳染性的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 RT-PCR 專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同)。
在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供),充分震
蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 RNA 的制備
7. 如果有 N 個(gè)樣品,最好設(shè)置 N+2 個(gè)提取,多出的一個(gè)是 PC(樣品制備陽(yáng)性
對(duì)照),一個(gè)是 NC(樣品制備陰性對(duì)照)。可以用 10μL 陽(yáng)性對(duì)照的 10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為 NC。
8. 用自選方法純化樣品的 RNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容。也可以選購(gòu)本公司的柱式病毒 RNAout。本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 20 次免 RNA 提取的核酸釋放劑試用裝,該釋放劑的裂解液可以直接作為RT-PCR 模板, 省略了 RNA 提取步驟。其使用手冊(cè)可向本公司客服索取。
三、Probe qRT-PCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),1 個(gè)用于 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(用第 4 號(hào)管的陽(yáng)性對(duì)照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)
置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好 后最后加):
成分 | 樣品管N+2 個(gè) | RT-PCR 陰性對(duì)照 管 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品管 (2-7 管) |
2×Probe qPCR MagicMix | 各 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
副流感病毒通用 qRT-PCR 探針 | 各 1 μL | 1 μL | 各 2 μL |
副流感病毒通用探針?lè)?span>qRT-PCR 引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
待測(cè)樣品 RNA 模板 | 各 6 μL | - | - |
超純水 | - | 6 μL | - |
第 7 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液 (2-7 號(hào)) |
- |
- | 各 6μL(2 號(hào)樣到 2 號(hào)管,3 號(hào)樣到 3 號(hào) 管…) |
11. 蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行 RT-PCR:
過(guò)程 | 溫度 | 時(shí)間 |
逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 30 min |
預(yù)變性 | 95℃ | 10 min |
RT-PCR 反應(yīng) (40 個(gè)循環(huán)) | 95℃ | 15 sec |
60℃ | 1 min(采集 FAM 通道的熒光 信號(hào)) |
五、數(shù)據(jù)處理
12. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè),則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品RNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。
13. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè),只判斷陽(yáng)性或陰性,則陰性對(duì)照 Ct 必須大于或等于 40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng),有典型擴(kuò)增曲線,Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對(duì)待測(cè)樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽(yáng)性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 40,則為陽(yáng)性。
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