大鼠牙胚細(xì)胞
產(chǎn)品名稱 :大鼠牙胚細(xì)胞
產(chǎn)品貨號(hào) :YLK-XB1262h
組織來源 :牙胚組織
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
牙胚細(xì)胞分離自牙胚組織;牙胚是牙齒最開始發(fā)育階段的形態(tài),是由牙板向深層的結(jié)締組織內(nèi)伸延,在其最末端細(xì)胞增生,進(jìn)一步發(fā)育成牙胚。牙胚有三部分組成:
①成釉器(enam elorgan),起源于口腔外胚層,形成釉質(zhì);
②牙乳頭(dentalpapilla),起源于外胚層間充質(zhì),形成牙髓和牙本質(zhì);
③牙囊(dentalsac),起源于外胚層間充質(zhì),形成牙骨質(zhì)、牙周膜和固有牙槽骨。牙胚的發(fā)生是口腔上皮和外胚間充質(zhì)相互作用的結(jié)果。在胚胎的第5周,覆蓋在原口腔的上皮由兩層細(xì)胞組成,外層是扁平上皮細(xì)胞,內(nèi)層為矮柱狀的基底細(xì)胞。在未來的牙槽突區(qū),深層的外胚層間充組織誘導(dǎo)上皮增生,開始僅在上下頜弓的特定點(diǎn)上,上皮局部增生,很快增厚的上皮相互連接,依照頜骨的外形形成一馬蹄形上皮帶,稱為原發(fā)性上皮帶。在胚胎的第7周,這一上皮帶繼續(xù)向深層生長,并分裂為兩個(gè):向頰(唇)方向生長的上皮板稱前庭板,位于舌(腭)側(cè)的上皮板稱為牙板(dentalla mina)。在胚胎的第8~10周,前庭板繼續(xù)向深層生長,與發(fā)育的牙槽嵴分開,前庭板表面上皮變性,形成口腔前庭溝。
質(zhì)量檢測(cè)
優(yōu)利科生物實(shí)驗(yàn)室分離的該細(xì)胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 : 含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 : 每2-3天換液一次
生長特性 : 貼壁
細(xì)胞形態(tài) : 梭形、多角形
傳代特性 : 可傳3代左右
傳代比例 : 1:2
消 化 液 : 0.25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 : 氣相:空氣,95% ;C O2,5%
該細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
客戶收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白/酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完培至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液,1000rpm,離心5min,保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,用5ml完培基重懸沉淀,接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱)。
5) 原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時(shí),需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請(qǐng)注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰/酶消化時(shí)間不宜過長,否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和公司技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?,個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。