大鼠滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞
產(chǎn)品名稱 :大鼠滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞
產(chǎn)品貨號 :YLK-XB1261h
組織來源 :滑膜組織
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡介:
滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞分離自滑膜組織;滑膜組織是位于關(guān)節(jié)腔內(nèi)面的內(nèi)襯結(jié)構(gòu),各種關(guān)節(jié)內(nèi)疾病均會累及滑膜。而滑膜細(xì)胞是維持關(guān)節(jié)正常功能的重要組織結(jié)構(gòu),同時(shí)在各種關(guān)節(jié)疾患中也是主要病變部位。骨關(guān)節(jié)炎(O A )以關(guān)節(jié)軟骨退行性變?yōu)樘卣?,其病理改變累及關(guān)節(jié)的各個(gè)組成部分,但絕不僅局限于軟骨,還包括軟骨下骨、滑膜、半月板和韌帶。各組成部分的病理改變相互影響,相互作用,共同加速關(guān)節(jié)的退變。滑膜細(xì)胞是構(gòu)成滑膜層的最大細(xì)胞群體,是維持關(guān)節(jié)正常功能的重要組織結(jié)構(gòu),它包埋在顆粒狀無定性的基質(zhì)中,基質(zhì)內(nèi)有分散的纖維分布。
滑膜由A 型(巨噬樣滑膜細(xì)胞)、B 型(成纖維樣滑膜細(xì)胞)以及C 型(樹突細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞)細(xì)胞組成?;ぜ?xì)胞主要功能:①滑膜細(xì)胞產(chǎn)生潤滑液成分,并且與關(guān)節(jié)腔的吸收和血液/潤滑液交換有關(guān);②滑膜細(xì)胞增生,表現(xiàn)為不依賴于支持物生長,并且分泌大量的效應(yīng)分子來促進(jìn)炎癥和關(guān)節(jié)損壞;③是自身自分泌和旁分泌網(wǎng)絡(luò)中效應(yīng)因子的一部分。
細(xì)胞特性
1) 細(xì)胞來源于實(shí)驗(yàn)動物正常關(guān)節(jié)組織。
2) 細(xì)胞鑒定:CD105免疫熒光染色為陽性。
3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5) 細(xì)胞生長方式:成纖維樣細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
質(zhì)量檢測
優(yōu)利科生物實(shí)驗(yàn)室分離的該細(xì)胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 :含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 : 每2-3天換液一次
生長特性 : 貼壁 細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 : 可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
傳代比例 : 1:2
消 化 液 : 0.25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 : 氣相:空氣,95% ;C O2,5%
該細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
客戶收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白/酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完培至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液,1000rpm,離心5min,保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,用5ml完培基重懸沉淀,接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱)。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時(shí),需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰/酶消化時(shí)間不宜過長,否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和公司技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時(shí)和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。