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綿羊痘病毒PCR試劑盒

簡要描述:綿羊痘病毒(Sheeppox Virus,SPPV)會引起綿羊痘,是一種接觸性傳染病,呈流行性。它的特征是在全身皮膚、有時也在粘膜上出現(xiàn)典型的痘疹,病羊發(fā)熱并有較高的死亡率,大多數(shù)綿羊生產(chǎn)國均有流行。綿羊痘病毒PCR試劑盒就是以PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測綿羊痘病毒的試劑盒。

  • 更新時間:2024-07-03
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 生產(chǎn)地址:上海
  • 訪  問  量:1078

詳細介紹

品牌YLKBIO純度100
貨號YLK10046P規(guī)格50T
供貨周期現(xiàn)貨主要用途科研
應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè)英文名稱:Sheeppox?Virus(SPPV)
運輸:低溫保存:-20℃
有效期:1年

產(chǎn)品名稱:

商品名稱:綿羊痘病毒PCR試劑盒

Name:Sheeppox Virus(SPPV) PCR試劑盒

包裝規(guī)格:50T/盒


預(yù)期用途

綿羊痘是由羊痘病毒屬中綿羊痘病毒(Sheep pox virus, SPV)引起羊的一種急性、熱性、接觸性傳染病,被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)列為需通報傳染病,我國列為一類動物疾病。該病主要表現(xiàn)為體溫升高,皮膚、黏膜、內(nèi)臟器官表面發(fā)生廣泛性的丘疹、皰疹或結(jié)節(jié),淋巴結(jié)腫大,病畜消瘦,毛的品質(zhì)下降,產(chǎn)乳量大幅度降低,嚴重時導致死亡。羊痘分布廣泛,世界各國具有本病爆發(fā)和流行的相關(guān)報道,中東、非洲北部及中部、亞洲流行尤為嚴重。

本試劑盒適用于檢測綿羊皮膚病變組織、淋巴結(jié)、水泡液等樣本中的綿羊痘病毒,用于綿羊痘病毒感染的輔助診斷。

檢驗原理:

綿羊痘病毒PCR試劑盒采用 TaqMan 探針法實時熒光 PCR 技術(shù),設(shè)計一對綿羊痘病毒特異性引物,結(jié)合一條特異性探針, 用熒光 PCR 技術(shù)對綿羊痘病毒的 DNA 進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染病料的病原學診斷。

試劑組成:

包裝規(guī)格

50T/盒

SPV 反應(yīng)液

500μL×2 管

酶液

50μL×1 管

SPV 陽性質(zhì)控品

50μL ×1 管

陰性質(zhì)控品

250μL ×1 管

說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

儲存條件及有效期:

-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融次數(shù)不超過 5 次,有效期 12 個月。

適用儀器:

ABI7500、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

標本采集:

綿羊皮膚病變組織、淋巴結(jié) 5g;水泡液取 1mL。

保存和運輸:

采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應(yīng)不超過 24 h;若需長期保存,應(yīng)放置-70℃以下保存,凍融不超過 3 次。

使用方法:

1.  樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1  樣本前處理

組織樣品:每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g,手/術(shù)/剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中,8000rpm 離心 2min,取上清液 100μL 于1.5mL 滅菌離心管中;咽/拭子樣品直接取 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

1.2  核酸提取

推薦采用優(yōu)利科(上海)生命科學有限公司生產(chǎn)的核酸/提取/或純化試劑(磁珠法或離心柱法)進行核酸提取,請按照試劑說明書進行操作。

2.  試劑配制(試劑準備區(qū))

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿

10 份,多配制 1 份),每測試反應(yīng)體系配制如下表:

試劑

SPV 反應(yīng)液

酶液

用量

19μL

1μL

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中,20μL/管。

3.  加樣(樣本處理區(qū))

將步驟 1 提取的核酸、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 5μL,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻, 短暫離心。

4.  PCR 擴增(核酸擴增區(qū))

4.1  將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);

4.2  設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL;

熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列儀器請勿選擇

ROX 參比熒光,選擇 None 即可。

4.3  推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:

步驟

循環(huán)數(shù)

溫度

時間

收集熒光信號

1

1 cycle

95℃

2min

2

45 cycles

95℃

15sec

60℃

30sec

5.   結(jié)果分析判定

5.1   結(jié)果分析條件設(shè)定(請參照各儀器使用說明書進行設(shè)置,以分析 ABI7500 儀器為例)

反應(yīng)結(jié)束后自動保存結(jié)果,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值(用戶可根據(jù)實際情況自行調(diào)整,Start 值可設(shè)在 3~15、End 值可設(shè)在 5~20,使閾值線位于擴增曲線指數(shù)期,陰性質(zhì)控品的擴增曲線平直或低于閾值線),點擊 Analyze 自動獲得分析結(jié)果。

5.2   結(jié)果判斷

陽性:檢測通道 Ct 值≤40,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線; 陰性:樣本檢測結(jié)果 Ct 值>40 或無 Ct 值。

5.3   質(zhì)控標準

陰性質(zhì)控品:無特異性擴增曲線或無 Ct 值顯示;

陽性質(zhì)控品:擴增曲線有明顯指數(shù)增長期,且 Ct 值≤32; 以上條件應(yīng)同時滿足,否則實驗視為無效。

6.檢測方法的局限性

1. 樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān);

2. 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;

3. 陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏,會導致假陽性結(jié)果;

4. 病原體在流行過程中基因突變、重組,會導致假陰性結(jié)果;

5. 不同的提取方法存在提取效率差異,會導致假陰性結(jié)果;

6. 試劑運輸,保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結(jié)果;

7. 本檢測結(jié)果僅供參考,如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

【注意事項】

1. 所有操作嚴格按照說明書進行;

2. 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,wan全混勻并短暫離心;

3. 反應(yīng)液應(yīng)避光保存;

4. 反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

5. 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;

6. 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行,以免交叉污染;

7. 實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

8. 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待,并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。

【參考文獻】

[1] 康文玉, 徐自忠, 高洪等. 羊痘病毒[J]. 中國畜牧獸醫(yī), 2004, 31(12):33-36.

[2] 陳軼霞. 羊痘診斷技術(shù)研究進展[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學, 2008, 36(34):15008-15009.

[3]   國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局. SN/T 2452-2010 綿羊痘和山羊痘檢疫技術(shù)規(guī)范[S].

[4]   李楊, 于少雄, 顏新敏, 等. 綿羊痘病毒 TaqMan-MGB 熒光定量 PCR 快速檢測方法的建立[J]. 中國預(yù)防獸醫(yī)學報, 2016.


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