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諾如病毒G1型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

簡(jiǎn)要描述:諾如病毒G1型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒:諾如病毒(Norwalk Virus)是單股正鏈 RNA 病毒,屬于人類杯狀病毒屬,是一種引起非細(xì)菌性急性腸胃炎的病毒,如諾病毒感染性強(qiáng),以腸道傳播為主,通過口-糞傳播,以污染的水源、食物、貝類、物品、空氣作為主要傳播載體。諾如病毒可分為 G I-G 五個(gè)基因群,其中引起人類感染的主要是 G1 和 G2 群。因此快速靈敏診斷具有重要意義。

  • 更新時(shí)間:2024-07-03
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 生產(chǎn)地址:上海
  • 訪  問  量:1145

詳細(xì)介紹

品牌YLKBIO純度詳詢
貨號(hào)YLK10363P規(guī)格50T
供貨周期現(xiàn)貨主要用途科研實(shí)驗(yàn)
應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè)英文名稱:Norwalk Virus G1(NV-1) Probe qRT-PCR Kit
運(yùn)輸:快遞形式保存條件:-20℃保存
有效期:12個(gè)月自備試劑樣品 RNA
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品諾如病毒G1型可視化 RT-LAMP 檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品名稱:諾如病毒G1型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

Name:Norwalk Virus G1(NV-1) RT-PCR Kit

包裝規(guī)格:50T/盒。

諾如病毒(Norwalk Virus)是單股正鏈 RNA 病毒,屬于人類杯狀病毒屬,是一種引起非細(xì)菌性急性腸胃炎的病毒,如諾病毒感染性強(qiáng),以腸道傳播為主, 通過口-糞傳播,以污染的水源、食物、貝類、物品、空氣作為主要傳播載體。諾如病毒可分為 G I-G 五個(gè)基因群,其中引起人類感染的主要是 G1 和 G2 群。因此快速靈敏診斷具有重要意義。本產(chǎn)品以探針法熒光定量 RT-PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測(cè)諾如病毒 G1 型的試劑盒,它具有下列特點(diǎn):

1.即開即用,用戶只需要提供樣品 RNA 模板。

2.引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。

3.提供陽性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。

4.特異性高,引物是根據(jù)諾如病毒 G1 型高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他病毒的RNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。

5.本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。

6.本產(chǎn)品只能用于科研。


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規(guī)格及成分

成分十孔盒包裝
探針法 qRT-PCR 緩沖液500μL藍(lán)蓋
探針法 qRT-PCR 酶混合液100μL(紅蓋)
熒光PCR 專用模板稀釋液1 mL黃蓋

諾如病毒 G1 型探針法 qRT-PCR

引物混合液

100 μL白蓋
諾如病毒 G1 型 qRT-PCR 探針50 μL棕色管

諾如病毒 G1 型探針法 qRT-PCR

陽性對(duì)照(1×10E拷貝/μL)

50 μL黃蓋
使用手冊(cè)

諾如病毒G1型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為12個(gè)月。

自備試劑樣品:RNA

使用方法

一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原, 本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對(duì)照。

1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

2.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 RT-PCR 專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同)。

3.在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4.換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5.換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 RNA 的制備

7.如果有 N 個(gè)樣品,最好設(shè)置 N+2 個(gè)提取,多出的一個(gè)是 PC(樣品制備陽

性對(duì)照),一個(gè)是 NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢杂?0μL 陽性對(duì)照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣, 以此作為PC。另外用水作為 NC。

8.用自選方法純化樣品的 RNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容。也可以選購(gòu)本公司的柱式病毒 RNAout。

三、Probe qRT-PCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)

9.如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè)PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),1 個(gè)用于 PCR 陽性對(duì)照(用第 4 號(hào)管的陽性對(duì)照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

10.在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照,并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好

后最后加):

成分

樣品管

N+2 個(gè)

RT-PCR

陰性對(duì)照管

標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品管

(2-7 管)

探針法 qRT-PCR 緩沖液各 10 μL10 μL各 10 μL
探針法 qRT-PCR 酶混合液各 2 μL2 μL各 2 μL
諾如病毒 G1 型 qRT-PCR 探針各 1 μL1 μL各 1 μL

諾如病毒 G1 型探針法 qRT-PCR

引物混合液
各 2 μL2 μL各 2 μL
待測(cè)樣品 RNA 模板各 5 μL--
超純水-5 μL-

第 7 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液

(2-7 號(hào))
--

各 5 μL(2號(hào)樣到 2 號(hào)管,3 號(hào)樣到3 號(hào)管…)













11.蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行 qRT-PCR:

過程溫度時(shí)間
逆轉(zhuǎn)錄
50℃30min
預(yù)變性
94℃10min

qRT-PCR反應(yīng)

(40個(gè)循環(huán))

94℃15sec
60℃1min(采集FAM通道的熒光信號(hào))







四、數(shù)據(jù)處理

12.如果把本試劑盒用于定量檢測(cè),則以陽性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

13.如果把本試劑盒用于定性檢測(cè),只判斷陽性或陰性,則陰性對(duì)照 Ct 必須大于或等于 40。陽性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng),有典型擴(kuò)增曲線,Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對(duì)待測(cè)樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 35,則為陽性。

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