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果糖-1,6-二磷酸(Fructose-1,6 Diphosphate,F(xiàn)DP)試劑盒說明書

發(fā)布時(shí)間:2023/10/25      點(diǎn)擊次數(shù):267

果糖-1,6-二磷酸(Fructose-1,6 Diphosphate,FDP)試劑盒說明書

                                                    微量法100T/96S


    意:正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義:

果糖1,6-二磷酸是機(jī)體內(nèi)的高能代謝物和代謝調(diào)控劑,是糖酵解途徑的重要中間體,廣泛存在于動植物和微生物體內(nèi),能影響細(xì)胞內(nèi)鉀離子的濃度,改善葡萄糖和其他能量底物的代謝,促進(jìn)組織氧的釋放,廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)藥制劑。

 

測定原理:

醛縮酶催化果糖1,6-二磷酸降解,產(chǎn)物與DNPH縮合成紫紅色物質(zhì),在540nm有特征吸收峰。

 

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

天平、低溫離心機(jī)、研缽、恒溫水浴鍋、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板。

 

試劑組成和配制:

試劑一:液體110mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體0.4mL×1支,4℃避光保存。

試劑三:液體4mL×1瓶,4℃避光保存。

試劑四:液體16mL×1瓶,4℃保存。

 

樣品處理:

1.        組織:按照質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL試劑一)加入試劑一,冰浴勻漿后于4℃,10000g離心10min,取上清待測。

2.        細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后4℃,10000g離心10min,取上清待測。

3.        液體:直接檢測。

 

測定操作:

 


對照管

測定管

樣品(μL


20

蒸餾水(μL

20


試劑一(μL

44

40

試劑二(μL


4

充分混勻,37℃反應(yīng)30min

試劑三(μL

40

40

充分混勻,37℃溫育10min

試劑四(μL

160

160

充分混勻,于37℃溫育10min,于微量石英比色皿/96孔板,蒸餾水調(diào)零,測定540nm處吸光值,記為A對照管和A測定管,△A=A測定管- A對照管,對照管只要做一管。

 

 

計(jì)算公式:

a.        用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y= 0.6971x+0.0012,R2=0.9983

1.按照質(zhì)量計(jì)算

FDPmg/g 鮮重)= (A-0.0012) ÷0.6971÷W÷V樣總)

= 1.43×(A-0.0012)÷W

2.按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

FDPmg/104 cell= (A-0.0012) ÷0.6971÷(細(xì)胞數(shù)量÷V樣總)

=1.43×(A-0.0012)÷細(xì)胞數(shù)量

3.按照液體體積計(jì)算

FDPmg/mL= (A-0.0012) ÷0.6971

= 1.43×(A-0.0012)

W:樣本質(zhì)量,g;V樣總:加入提取液體積,1mL

 

b.       96孔板測定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y= 0.3486x+0.0012,R2=0.9983

1.按照質(zhì)量計(jì)算

FDPmg/g 鮮重)= (A-0.0012) ÷0.3486÷W÷V樣總)

= 2.87×(A-0.0012)÷W

2.按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

FDPmg/104 cell= (A-0.0012) ÷0.3486÷(細(xì)胞數(shù)量÷V樣總)

= 2.87×(A-0.0012)÷細(xì)胞數(shù)量

3.按照液體體積計(jì)算

FDPmg/mL= (A-0.0012) ÷0.3486

= 2.87×(A-0.0012)

W:樣本質(zhì)量,g;V樣總:加入提取液體積,1mL

 

注意事項(xiàng):

Z低檢出限為1.72 mg/L。


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