木質(zhì)素(Lignin)含量試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法 100管/96樣
注 意 :正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
木質(zhì)素是構(gòu)成植物細(xì)胞壁的成分之一,是由聚合的芳香醇構(gòu)成的一類(lèi)物質(zhì),存在于木質(zhì)組織中,主要作用是通過(guò)形成交織網(wǎng)來(lái)硬化細(xì)胞壁。木質(zhì)素主要位于纖維素纖維之間,起抗壓作用。
測(cè)定原理:
木質(zhì)素中的酚羥基發(fā)生乙?;笤?/span>280nm處有特征吸收峰,280nm的吸光值高低與木質(zhì)素含量正相關(guān)。
需自備的儀器和用品:
天平、40目篩,玻璃試管、燒杯、離心機(jī),恒溫水浴鍋、封口膜、烘箱、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、高氯酸,濃硫酸。
試劑組成和配制:
試劑一:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體100mL×1瓶,4℃保存。
樣品處理:
樣品80℃烘干至恒重,粉碎,過(guò)40目篩,稱(chēng)取約2mg(記為W)于10mL玻璃試管中(務(wù)bi用玻璃試管,不可用Ep管)
測(cè)定操作表:
空白管 | 測(cè)定管 | |
樣本(mg) | 2 | |
試劑一(μL) | 500 | 500 |
高氯酸(μL) | 20 | 20 |
于10mL玻璃試管中,用封口膜密封,充分混勻,80℃水浴40min,每隔10min震蕩一次,然后自然冷卻 | ||
試劑二(μL) | 500 | 500 |
充分混勻 | ||
上清(μL) | 20 | 20 |
試劑三(μL) | 980(參照注意事項(xiàng)四) | 980(參照注意事項(xiàng)四) |
取200μL于微量石英比色皿/96孔板,測(cè)定280nm處吸光值A。分別記為A空白管和A測(cè)定管,ΔA=A測(cè)定管-A空白管 |
計(jì)算公式:
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.0347x+0.0068,R2=0.9889
Lignin(mg/g干重)= (ΔA-0.0068)÷0.0347×V反總×10-3÷W×T=0.0294×(ΔA-0.0068) ÷0.002×50
V反總:反應(yīng)總體積:1.02mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:稀釋倍數(shù)
注意事項(xiàng):
1. 試劑一有毒性,請(qǐng)操作時(shí)做好防護(hù)措施,加熱前必須用封口膜密封,以防氣體溢出。
2. 加熱過(guò)程中有劇烈反應(yīng),震蕩時(shí)輕搖,以免壓力過(guò)大噴出造成人身傷害。
3. 試劑三具有強(qiáng)刺激性,建議操作過(guò)程全部在通風(fēng)櫥子操作。
4. 取上清加試劑三步驟根據(jù)自己樣品乙酰化程度,試劑三的用量可調(diào)整,保證吸光值在0.1-0.8之間即可,并在公式中參與計(jì)算。
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