土壤脫氫酶(Soil dehydrogenase, sDHA)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法100T/96S
注 意 :正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
土壤脫氫酶(Soil dehydrogenase, sDHA)的活性可以反映土壤體系內(nèi)活性微生物量以及其對(duì)有機(jī)物的降解活性,可以作為土壤微生物的降解性能指標(biāo)。
測(cè)定原理:
氫受體2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride,TTC)在細(xì)胞呼吸過(guò)程中接受氫以后,被還原為三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone, TF),在波長(zhǎng)485nm處有最大吸收峰,采用分光光度法于485nm測(cè)定其吸光值,即得土壤脫氫酶活性。
自備實(shí)驗(yàn)儀器及用品:
篩子、天平、恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水、甲醇(不允許快遞,請(qǐng)用戶自備)。
試劑的組成和配制:
試劑一:粉劑×1瓶,使用前加10mL試劑二溶解,4℃避光保存(盡量現(xiàn)配現(xiàn)用)。
試劑二:液體20mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:甲醇,自備。
樣品處理:測(cè)定步驟和操作表:
新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干,過(guò)30~50目篩。
空白管 | 測(cè)定管 | |
樣品(g) | 0.05 | |
試劑一(μL) | 100 | |
試劑二(μL) | 100 | |
充分混勻,37℃培養(yǎng)24h | ||
試劑三(μL) | 900 | 900 |
振蕩1h,8000g,25℃,離心5min,取200μL上清于微量石英比色皿/96孔板,測(cè)定A485,△A=A測(cè)定-A空白管??瞻坠苤灰鲆还堋?/span> |
脫氫酶活力計(jì)算:
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.0211x - 0.0312;R2 = 0.9988;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μg/mL),y為吸光值。
酶活單位定義:在37℃時(shí),每克土壤樣品每天催化產(chǎn)生1μgTF為一個(gè)酶活性單位。
sDHA(μg/ d /g 土樣)=(△A+0.0312)÷ 0.0211×V反總÷W÷T= 47.39×(△A+0.0312)÷W
V反總:反應(yīng)總體積,1mL;T:培養(yǎng)時(shí)間,1d;W:樣品質(zhì)量,g
注意事項(xiàng):
配制好的試劑一避光保存于4℃,最好在一周內(nèi)使用,若出現(xiàn)紅色,則不能使用。
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