土壤酸性轉化酶(Solid-Acid invertase, S-AI)試劑盒說明書
微量法100管/48樣
注 意 :正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
S-AI在pH 為4.5~5.0(酸性)條件下催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖,是土壤微生物蔗糖代謝關鍵酶之一。
測定原理:
S-AI催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖,進一步與3,5-二硝基水楊酸反應,生成棕紅色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范圍內510nm光吸收增加速率與AI活性成正比。
自備用品:
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體50mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入25mL試劑一充分溶解備用;用不完的試劑4℃保存;
試劑三:液體10mL×1瓶,4℃保存;
樣品處理:
新鮮土樣自然風干或37度烘箱風干,過30~50目篩。
測定步驟和加樣表:
試劑名稱(μL) | 測定管 | 對照管 |
風干土樣(g) | 0.05 | 0.05 |
試劑一 | 400 | |
試劑二 | 400 |
混勻, 37℃準確水浴30min后,95℃水浴10min(蓋緊,以防水分散失),流水冷卻后
充分混勻(以保證濃度不變),10000g 25℃離心10min,取上清液
上清液 | 200 | 200 |
試劑三 | 100 | 100 |
混勻,95℃水浴10min(蓋緊,以防止水分散失),流水冷卻后充分混勻, 510nm處,記錄各管吸光值A,如果吸光值大于2,可以用蒸餾水稀釋后測定(計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)),ΔA=A測定-A對照。
S-AI活性計算:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0016x -0.001;x為標準品濃度(μg/mL),y為吸光值。
單位的定義:每天每g土樣中產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個S-AI活力單位。
S-AI活力(mg/d /g土樣)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V反總÷W÷T ÷1000=240×(ΔA+0.001)
V反總:反應體系總體積:0.4mL;T:反應時間,1/48d; W:樣本質量,0.05g;1mg=1000μg。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0008x -0.001;x為標準品濃度(μg/mL),y為吸光值。
單位的定義:每天每g土樣中產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個S-AI活力單位。
S-AI活力(mg/d/g土樣)=[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V反總÷W÷T ÷1000=480×(ΔA+0.001)
V反總:反應體系總體積:0.4mL;T:反應時間,1/48d; W:樣本質量,0.05g;1mg=1000μg。
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