土壤β-葡萄糖苷酶(Solid-β-Glucosidase,S-β-GC)試劑盒說(shuō)明書
微量法100管/48樣
注 意:正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
S-β-GC能夠催化水解芳基或烴基與糖基原子團(tuán)之間的糖苷鍵生成葡萄糖,是纖維素分解酶系中重要組成成分之一,在土壤微生物的糖類代謝方面具有重要生理功能。
測(cè)定原理:
S-β-GC能夠催化對(duì)-硝基苯-β-D吡喃葡萄糖苷生成對(duì)-硝基苯酚,后者在400nm有特征光吸收。
自備用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:甲苯5mL×1瓶,4℃保存;(自備)
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入10mL蒸餾水,充分溶解備用,用不完的試劑仍-20℃保存;
試劑三:液體20mL×1瓶,4℃保存;
試劑四:液體15mL×1瓶,4℃保存;
樣品處理:
新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干,過(guò)30~50目篩。
測(cè)定步驟:
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至400nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 加樣表
試劑名稱 | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
風(fēng)干土樣(g) | 0.02 | 0.02 |
試劑一(μL) | 10 | 10 |
室溫振蕩混勻15min | 90℃振蕩混勻15min | |
試劑二(μL) | 130 | |
蒸餾水 | 130 | |
試劑三(μL) | 160 | 160 |
混勻, 37℃振蕩反應(yīng)1h后,90℃水浴5min(蓋緊,防止水分散失),流水冷卻,
10000g 25℃離心10min,取上清液(在EP管或96孔板中加入下列試劑)
上清液(μL) | 70 | 70 |
試劑四(μL) | 130 | 130 |
充分混勻,室溫靜置2min后, 400nm處測(cè)定吸光值A(chǔ),計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
S-β-GC活力計(jì)算:
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.0032x -0.0027;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/L),y為吸光值。
單位的定義:每天每g土樣中產(chǎn)生1 μmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。
S-β-GC活力(μmol/d/g 土樣)= (ΔA+0.0027) ÷0.0032×V反總÷W÷T =112.5×(ΔA+0.0027)
T:反應(yīng)時(shí)間,1h=1/24d; V反總:反應(yīng)體系總體積:3×10-4 L;W:樣本質(zhì)量,0.02g。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.0016x -0.0027;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/L),y為吸光值。
單位的定義:每天每g土樣中產(chǎn)生1 μmol對(duì)-硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位。
S-β-GC活力(μmol/d/g 土樣)= (ΔA+0.0027) ÷0.0016×V反總÷W÷T =225×(ΔA+0.0027)
T:反應(yīng)時(shí)間,1h=1/24d; V反總:反應(yīng)體系總體積:3×10-4 L;W:樣本質(zhì)量,0.02g。
電話
微信掃一掃