蔗糖(sucrose)含量試劑盒說明書
微量法100管/96樣
注 意 :正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
蔗糖是植物光合作用的主要產(chǎn)物,也是糖分運(yùn)輸和儲(chǔ)藏的主要形式。因此,測(cè)定蔗糖含量對(duì)于植物糖代謝具有重要意義。此外,蔗糖含量是飲料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等產(chǎn)品質(zhì)量控制的重要指標(biāo)之一。
測(cè)定原理:
先用堿與樣品共熱,破壞其中的還原糖。然后在酸性條件下將蔗糖水解生成葡萄糖和果糖,果糖進(jìn)一步與間苯二酚反應(yīng),生成有色物質(zhì),在480nm下有特征吸收峰。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100ml×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體10mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:液體2ml×1瓶,4℃保存;
試劑三:液體 20ml×1瓶,4℃保存;
試劑四:液體 6ml×1瓶,4℃避光保存;
試劑五:粉劑0.5g×1瓶,常溫保存。
蔗糖提?。?/span>
稱取0.1~0.2g樣本,常溫研碎,加入0.5mL提取液,適當(dāng)研磨后快速轉(zhuǎn)移到離心管中,置于80℃水浴鍋中10min,振蕩3~5次,冷卻后,4000g,常溫離心10min,取上清,加入2mg試劑五,80℃脫色30min,再加入0.5mL提取液,冷卻后,4000g,常溫離心10min,取上清液測(cè)定。
測(cè)定步驟:
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至480nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 樣本測(cè)定,(在EP管中依次加入下列試劑):
試劑(μL) | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測(cè)定管 |
樣本 | 25 | ||
試劑一 | 25 | ||
蒸餾水 | 25 | ||
試劑二 | 15 | 15 | 15 |
混勻,沸水浴煮沸5min左右(蓋緊,防止水分散失)
試劑三 | 175 | 175 | 175 |
試劑四 | 50 | 50 | 50 |
混勻,沸水浴30min,冷卻后取200μL至微量石英比色皿或96孔板中測(cè)定480nm處光吸收值,空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管分別記為A1、A2和A3??瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)管只要做一管。
蔗糖含量計(jì)算:
1、按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算
蔗糖含量(mg/mg prot)=(C標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)= (A3-A1)÷(A2-A1) ÷Cpr
此法需要自行測(cè)定蛋白濃度。
2、按照樣品質(zhì)量計(jì)算
蔗糖含量(mg/g鮮重)=(C標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=(A3-A1)÷(A2-A1)÷W。
C標(biāo)準(zhǔn)管:標(biāo)準(zhǔn)管濃度,1mg/mL;V1:加入樣本體積,0.025mL;V2:加入提取液體積,1mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。
注意:Z低檢測(cè)限為100ng/g鮮重或1ng/mg prot
電話
微信掃一掃