亚洲无码不卡永久免费,亚洲无码精品在线播放,国产在线精品第一区二区,日本高清一区二区三区欧美

您好!歡迎訪問優(yōu)利科(上海)生命科學有限公司網(wǎng)站!
全國服務咨詢熱線:

15021281375

當前位置:首頁 > 資料下載 > ATP-檸檬酸裂解酶(ATP-citrate lyase,ACL)試劑盒說明書

ATP-檸檬酸裂解酶(ATP-citrate lyase,ACL)試劑盒說明書

發(fā)布時間:2023/5/7      點擊次數(shù):294

ATP-檸檬酸裂解酶(ATP-citrate lyase,ACL)試劑盒說明書

                                          微量法100/96

 

   意 :正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:                           

ACLEC4.1.3.8是脂肪酸合成中的關(guān)鍵酶,其催化產(chǎn)生的乙酰輔酶A可用于脂肪酸合成和碳鏈延長、黃酮類物質(zhì)合成、氨基酸合成等。

 

測定原理

ACLATP和輔酶A存在的情況下催化檸檬酸裂解為乙酰輔酶A、草酰乙酸、腺苷二磷酸和磷酸鹽。蘋果酸脫氫酶進一步催化草酰乙酸和NADH生成蘋果酸和NAD+,在340nm測定NADH減少速率,計算ACL活性。

 

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水

 

試劑組成和配制:

提取液:液體100mL×1瓶,4保存;

試劑一:液體20mL×1瓶,4保存;

試劑二:粉劑×1瓶,-20保存;

試劑三:液體2μL×1支,4保存;

 

樣本的前處理:

1、細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4離心10min,取上清,置冰上待測。

3、血清(漿)樣品:直接檢測。

 

測定步驟:

1、  分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、  樣本測定

1)工作液的配置,將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移至試劑一中,充分混合溶解,置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴5min(注意:可取少量試劑一至試劑二和試劑三中,充分混勻溶解后轉(zhuǎn)移至試劑一瓶中,重復2-3遍);用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。

2)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和190μL工作液,混勻,立即記錄340nm20s時的吸光值A1 2min20s后的吸光值A2,計算ΔA=A1-A2。

 

ACL活性計算:

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、血清(漿)ACL活力計算

單位定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。

ACLnmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷V÷T=1608×ΔA

2、組織、細菌或細胞中ACL活力計算

1)按樣本蛋白濃度計算

單位定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol NADH定義為一個酶活力單位。

ACLnmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr

2)按樣本鮮重計算

單位定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。

ACLnmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(W ×V÷V樣總)÷T=1608×ΔA÷W

3)按細菌或細胞密度計算:

單位定義:每1萬個細胞每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。

ACLnmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(500×V÷V樣總)÷T=3.216×ΔA

V反總:反應體系總體積,2×10-4 LεNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cmd:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,2 minCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細菌或細胞總數(shù),500萬。

 

b. 96孔板測定的計算公式如下

1、血清(漿)ACL活力計算

單位定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。

ACLnmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷V÷T=3216×ΔA

2、組織、細菌或細胞中ACL活力計算

1)按樣本蛋白濃度計算

單位定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol NADH定義為一個酶活力單位。

ACLnmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr

2)按樣本鮮重計算

單位定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。

ACLnmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(W× V÷V樣總)÷T=3216×ΔA÷W

3)按細菌或細胞密度計算:

單位定義:每1萬個細胞每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。

ACLnmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(500×V÷V樣總)÷T=6.432×ΔA

V反總:反應體系總體積,2×10-4 L;εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d96孔板光徑,0.5cm;V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,2 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,g500:細菌或細胞總數(shù),500萬。


文件下載    圖片下載    
優(yōu)利科(上海)生命科學有限公司
地址:金大公路8218號1幢
郵箱:1431486511@qq.com
傳真:
關(guān)注我們
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號了解更多信息:
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號
了解更多信息
庄浪县| 兴化市| 儋州市| 金华市| 龙里县| 保山市| 麻江县| 左云县| 错那县| 延吉市| 阿城市| 西吉县| 巧家县| 都匀市| 温州市| 隆尧县| 砚山县| 绍兴县| 桃江县| 黔南| 邛崃市| 长治市| 张家港市| 且末县| 海城市| 枝江市| 榆中县| 岳阳县| 洪湖市| 荆门市| 丹寨县| 信阳市| 莱州市| 沈阳市| 碌曲县| 盐亭县| 禹城市| 仙桃市| 海城市| 资源县| 万荣县|