亚洲无码不卡永久免费,亚洲无码精品在线播放,国产在线精品第一区二区,日本高清一区二区三区欧美

您好!歡迎訪問優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司網(wǎng)站!
全國(guó)服務(wù)咨詢熱線:

15021281375

當(dāng)前位置:首頁(yè) > 資料下載 > 乙醇脫氫酶(ADH)活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

乙醇脫氫酶(ADH)活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

發(fā)布時(shí)間:2023/5/5      點(diǎn)擊次數(shù):316

乙醇脫氫酶(ADH)活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書

                                             微量法 100T/96S

   意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義:

ADH是生物體內(nèi)短鏈醇代謝的關(guān)鍵酶,催化乙醇與乙醛可逆轉(zhuǎn)換,在很多生理過(guò)程中起著重要作用。哺乳動(dòng)物ADH主要在肝臟生成,肝臟損傷導(dǎo)致ADH釋放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否異常。

測(cè)定原理:

ADH催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+,NADH340nm處有吸收峰,而NAD+沒有;測(cè)定340nm 吸光度下降速率,來(lái)計(jì)算ADH活性。

自備儀器和用品:

研缽、冰、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液器和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一:液體×1瓶,室溫保存。

試劑二:液體×1瓶,4保存。              

試劑三:粉劑×2瓶,-20℃保存,臨用前每瓶加入9mL試劑二,現(xiàn)配現(xiàn)用。

試劑四:液體×1支,4保存。

粗酶液提?。?/span>

1、   組織:按照組織質(zhì)量(g:試劑一體(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。16000g,4離心20min,取上清置冰上待測(cè)。

2、   細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);16000g, 4離心20min,取上清液置冰上待測(cè)。

3、血清等液體:直接測(cè)定。

ADH測(cè)定操作:

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三在25水浴中保溫30 min。

3. 在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μL樣本上清液、160μL試劑三和20μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s75s時(shí)吸光值,分別記為A1A2。A測(cè)定管=A1-A2。

計(jì)算公式:

a. 使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1)按照蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義:25中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 1個(gè)酶活單位

ADH (nmol/min/mg prot) =(A÷ε÷d×V反總×109)÷(Cpr×V)÷T

=1608×A ÷Cpr

2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義:25中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 1個(gè)酶活單位。

ADH (nmol/min/g 鮮重) =(A÷ε÷d×V反總×109)÷(W×V÷V樣總)÷T

=1608×A ÷W

3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

活性單位定義:25中每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1nmol NADH 1個(gè)酶活單位。

ADH (nmol/min/104cell) = (A÷ε÷d×V反總×109) ÷(細(xì)胞數(shù)量×V÷V樣總)÷T

=1608×A ÷細(xì)胞數(shù)量

4)按液體體積計(jì)算

活性單位定義:25中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 1個(gè)酶活單位

ADH (nmol/min/mL) =(A÷ε÷d×V反總×109) ÷V÷T

=1608×A

εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1 cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,200μL=2×10-4 LCpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W :樣品質(zhì)量;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,20μL=0.02 mLV樣總:提取液體積,1 mLT:反應(yīng)時(shí)間,1min

b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1)按照蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義:25中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 1個(gè)酶活單位。

ADH (nmol/min/mg prot) =(A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V)÷T

=3215×A÷Cpr

2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義:25中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 1個(gè)酶活單位。

ADH (nmol/min/g 鮮重) =(A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V÷V樣總)÷T

=3215×A÷W

3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

活性單位定義:25中每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1nmol NADH 1個(gè)酶活單位

ADH (nmol/min/104cell) =(A÷ε÷d×V反總×109) ÷(細(xì)胞數(shù)量×V÷V樣總)÷T

=3215×細(xì)胞數(shù)量

4)按液體體積計(jì)算

活性單位定義:25中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 1個(gè)酶活單位。

ADH (nmol/min/mL) =(A÷ε÷d×V反總×109) ÷V÷T

=3215×A

εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d96孔板光徑,0.5 cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,200μL=2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W :樣品質(zhì)量;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,20μL=0.02 mL;V樣總:提取液體積,1 mLT:反應(yīng)時(shí)間,1min。



文件下載    圖片下載    
優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司
地址:金大公路8218號(hào)1幢
郵箱:1431486511@qq.com
傳真:
關(guān)注我們
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號(hào)了解更多信息:
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號(hào)
了解更多信息
开鲁县| 黄梅县| 孙吴县| 文昌市| 隆子县| 普洱| 伊吾县| 新巴尔虎右旗| 安达市| 久治县| 武功县| 岳阳市| 龙岩市| 泰宁县| 呼和浩特市| 虹口区| 达尔| 襄城县| 阳曲县| 建宁县| 隆回县| 万宁市| 会宁县| 武乡县| 祁阳县| 宁都县| 武山县| 定襄县| 孝昌县| 镶黄旗| 石首市| 闸北区| 元氏县| 崇明县| 白山市| 临汾市| 墨竹工卡县| 房产| 西林县| 咸宁市| 伊吾县|