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水土亞硝酸鹽含量測定試劑盒說明書

發(fā)布時間:2023/4/9      點(diǎn)擊次數(shù):269

水土亞硝酸鹽含量測定試劑盒說明書

                                                     微量法100T/96S

   意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義:

亞硝酸鹽廣泛存在于水體和土壤中,不僅是有機(jī)氮分解的重要中間產(chǎn)物,也可能來自污染。人體攝入過量后,可誘發(fā)消化系統(tǒng)癌變。

測定原理:

在酸性條件下,亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸反應(yīng)生成重氮化合物,再與N-1-萘基乙二胺形成紫紅色偶氮化合物,在540nm處有特征吸收峰。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

天平、常溫離心機(jī)、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。

試劑組成和配制:

提取液:液體100mL×1瓶,室溫保存。

試劑一:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。

樣品處理:

1.        土壤樣品:準(zhǔn)確稱取過篩后的土壤約0.2g,加入1 mL 提取液,室溫震蕩1h,8000g25℃離心15min,靜置,待其分層后,取上清液待測。

2.        水樣:直接檢測;如果渾濁,可以離心后再測定。

測定步驟和操作表:

1、   分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長至540nm,蒸餾水調(diào)零。

2、   操作表


測定管

空白管

                       提取液(µL      


70

樣品(µL

70


試劑一(µL

65

65

試劑二(µL

65

65

混勻,25℃靜置15min,于微量石英比色皿/96孔板中檢測540nm處吸光值A。  

A=A測定 - A空白

注意:空白管只需測定一次。

亞硝酸鹽含量計算:

a.        用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為:y=0.234x + 0.0002,R2= 0. 999  x為標(biāo)準(zhǔn)品亞硝酸鈉濃度(μg/ml y為吸光值A。

NO2-(μg/g=(△A-0.0002÷0.234×V÷V÷V樣總×W×0.6668

                   

                    =A – 0.086÷0.234×1.5×0.6668÷W

                    =4.27×(△A-0.0002÷W

V樣總:加入提取液體積,1.5 mL; V樣:反應(yīng)中樣品體積,0.07mLW:樣品質(zhì)量,g。

b.96孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為:y=0.141x +0.095R2= 0. 9991  x為標(biāo)準(zhǔn)品亞硝酸鈉濃度(μg/ml y為吸光值A。

NO2-(μg/g =(△A-0.0002÷0.141×V÷V÷V樣總×W×0.6668

                   =(△A-0.0002÷0.141×1.5×0.6668÷W

                   =7.09×(△A-0.0002÷W

V樣總:加入提取液體積,1.5 mL; V樣:反應(yīng)中樣品體積,0.07mLW:樣品質(zhì)量,g。

注意事項(xiàng):

1.        試劑盒2-8保存。

2.        試劑對人體有一定的危害,請穿實(shí)驗(yàn)服,戴手套操作。

3.        若檢測出得OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍外,請將樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)臐饪s或稀釋(A540 <0.09濃縮,A540 > 1.5 適當(dāng)稀釋)。

4.        Z低檢出限為0.5μg/g。



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