尿素氮(BUN)試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義
尿素是生物體內(nèi)含氮化合物分解的終產(chǎn)物,在尿酶催化下分解轉(zhuǎn)化成氨。血液尿素氮是腎功能的主要指標(biāo)之一。
測定原理
樣本中尿素氮在氯化高鐵一磷酸溶液中與二乙酰一肟和硫胺脲共煮,生成一種紅色的二嗪化合物,其顏色的深淺與尿素氮含量成正比,采用二乙酰一肟法測定尿素氮含量。
自備實驗用品及儀器
天平、研缽、常溫離心機、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制
試劑一:液體6mL×1瓶,4℃避光保存,
試劑二:液體60mL×1瓶,4℃避光保存。
樣品處理
1. 組織:按照質(zhì)量(g):蒸餾水體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL蒸餾水)加入蒸餾水,勻漿后于25℃,10000g離心10min,取上清待測。
2. 細胞:按照細胞數(shù)量(104個):蒸餾水體積(mL )為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL蒸餾水),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后4℃,10000g離心10min,取上清置于冰上待測。
3. 血清或其它液體:直接檢測。
測定操作
空白管 | 測定管 | |
樣品(μL) | 20 | |
H2O(μL) | 20 | |
試劑一(μL) | 50 | 50 |
試劑二(mL) | 500 | 500 |
混勻,沸水浴10min,冷卻后,540nm下測定吸光值。△A=A測定-A空白??瞻坠苤灰鲆还?。
尿素氮含量計算:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y =2.048x + 0.0229,R2 = 0.9943;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為吸光值。
1、按照血清(漿)或者細胞培養(yǎng)液體積計算
尿素氮含量(mg/mL)= (△A-0.0229)÷2.048=0.4882×(△A-0.0229)
2、按照樣本質(zhì)量計算
尿素氮含量mg/g鮮重)= (△A-0.0229)÷2.048×V樣總÷W=0.4882×(△A-0.0229)÷W
3、按照蛋白濃度計算
尿素氮含量(mg/mg prot)= (△A-0.0229)÷2.048÷Cpr=0.4882×(△A-0.0229) ÷Cpr
V樣總:加入提取液體積,1 mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;
b.用96孔板測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y = 1.024x + 0.0229,R2 = 0.9943; x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為吸光值。
1、按照血清(漿)或者細胞培養(yǎng)液體積計算
尿素氮含量(mg/mL)= (△A-0.0229)÷1.024=0.9766×(△A-0.0229)
2、按照樣本質(zhì)量計算
尿素氮含量(mg/g鮮重)= (△A-0.0229)÷1.024×V樣總÷W=0.9766×(△A-0.0229)÷W
3、按照蛋白濃度計算
尿素氮含量(mg/mg prot)= (△A-0.0229)÷2.048÷Cpr=0.9776×(△A-0.0229) ÷Cpr
V樣總:加入提取液體積,1 mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細菌或細胞總數(shù),500萬。
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