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考馬斯亮藍法測蛋白含量測定試劑盒說明書

發(fā)布時間:2023/4/4      點擊次數:311

考馬斯亮藍法測蛋白含量測定試劑盒說明書

                                             微量法 100T/96S

   意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:

樣品可溶性蛋白質含量常常用于酶活性計算。此外,可溶性蛋白質含量也用于食品等質量分析。

測定原理:

在酸性溶液中,考馬斯亮藍G-250與蛋白質結合形成藍色復合物;該復合物在620nm處有最大吸收峰, 其顏色的深淺與蛋白質的濃度成正比。該方法靈敏度高,適合微量蛋白質分析。

自備儀器和用品:

離心機、酶標儀、96孔板、移液器和蒸餾水。

試劑組成和配制:

試劑一:液體11 mL×1瓶,4℃保存。

樣品中可溶性蛋白質提取:

1.        液體樣品:澄清液體樣品可以直接測定。

2.        組織樣品:按照組織質量(g:提取液體(mL)120的比例(建議稱取約0.05 g組織,加入1mL提取液自備,根據需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水)

冰浴勻漿,8000g,4離心10min,取上清,即待測液。(動物樣品常常需要稀釋)

3.        細菌、真菌:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4,離心10min,取上清置于冰上待測。

測定操作:

1. 酶標儀預熱30 min

2. 96孔板中加入:

試劑(μL

測定管

空白管

樣本

100


蒸餾水


100

試劑一

100

100

混勻后,測定波長620   nm吸光值,A=A測定-A空白。

注意:空白管只需要測定一次。

計算公式:

標準曲線:y = 7.1265x - 0.0007  R2 = 0.9997    x: 蛋白標準品濃度(mg/mL)

                                                y: 吸光值差值

1.按液體樣本體積計算:

Cprmg/mL=(A+0.0007)÷7.1265

                                =0.1403×(A+0.0007)

2.按組織樣本質量計算:

                   Cprmg/g=(A+0.0007)÷7.1265×V÷W          

                                                                       =0.1403×(A+0.0007)÷W

V總:提取液體積,1 mL; W:樣本質量,g。



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