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BCA法蛋白含量測(cè)定試劑盒說明書

發(fā)布時(shí)間:2023/4/3      點(diǎn)擊次數(shù):318

BCA法蛋白含量測(cè)定試劑盒說明書

                                           微量法100T/96S

 

    正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義:

樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外,可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。

 

測(cè)定原理:

堿性條件下,蛋白質(zhì)中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵,能將Cu2+還原成Cu+;2分子的BCACu+結(jié)合,生成紫色絡(luò)合物,在540-595nm有吸收峰,562nm處吸收峰Z強(qiáng)。

 

自備儀器和用品:

臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴鍋、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸餾水。

 

試劑組成和配制:

試劑A:液體25mL×1瓶,4℃保存。

試劑B:液體0.5mL×1支,4℃保存。

標(biāo)準(zhǔn)品:液體2mL×1支,4℃保存。

工作液配制:臨用前請(qǐng)根據(jù)擬用工作液體積(樣本數(shù)×0.2mL),將試劑AB按照501的比例混合,蓋緊后充分混勻。

 

樣品中可溶性蛋白質(zhì)提?。?/span>

1.        液體樣品:澄清液體樣品可以直接測(cè)定。

2.        組織樣品:按照組織質(zhì)量(g:提取液體(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液自備,根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水

冰浴勻漿,10000rpm4離心10min,取上清,即待測(cè)液。

3. 細(xì)菌、細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后10000rpm4,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

 

測(cè)定操作:

1. 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到562 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 工作液置于60℃水浴預(yù)熱30 min。


空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

測(cè)定管

蒸餾水(μL

4



標(biāo)準(zhǔn)品(μL


4


待測(cè)液(μL



4

工作液(μL

200

200

200

混勻后置于60℃保溫30min,于微量玻璃比色皿/96孔板,于562nm處測(cè)定吸光值A,分別記為A空白管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A測(cè)定管。

 

注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要做一次。

 

計(jì)算公式:

Cpr (mg/mL)= C標(biāo)準(zhǔn)品×A測(cè)定管-A空白管)÷A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)

           =0.5×A測(cè)定管-A空白管)÷A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)

Cpr (mg/g 鮮重)= C標(biāo)準(zhǔn)品×A測(cè)定管-A空白管)÷A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷ W

           =0.5×A測(cè)定管-A空白管)÷A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷ W

W: 樣本質(zhì)量,g

 

注意事項(xiàng):

BCA法蛋白含量測(cè)定試劑盒,適用于測(cè)定蛋白濃度在20-5000μg/ml樣品。測(cè)定前取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),若A測(cè)定管-A空白管﹥1.5,需將樣本用提取液稀釋后再測(cè)定,以確保測(cè)定的準(zhǔn)確性。


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