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犬冠狀病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

簡要描述:犬冠狀病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒犬冠狀病毒(Canine Corona Virus,CCoV )為單鏈 RNA 病毒,有 6-7 種多肽,其中 4 種是糖肽,不含 RNA 聚合酶及神經(jīng)氨酸酶。

  • 更新時間:2024-07-18
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 生產(chǎn)地址:上海
  • 訪  問  量:309

詳細介紹

品牌YLKBIO貨號YLK10395P
規(guī)格50T供貨周期現(xiàn)貨
主要用途科研實驗應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè)
保存條件低溫運輸,-20℃保存有效期12個月
試劑盒說明不同批號的試劑盒組分不可交互使用

犬冠狀病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒


產(chǎn)品名稱:犬冠狀病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

英文名稱:Canine Corona Virus (CCoV) Probe qRT-PCR Kit

犬冠狀病毒(Canine Corona Virus,CCoV )為單鏈 RNA 病毒,有 6-7 種多肽,其中 4 種是糖肽,不含 RNA 聚合酶及神經(jīng)氨酸酶??墒谷l(fā)生程度不同的胃腸炎癥狀,特征有頻繁嘔吐、腹瀉、沉郁、厭食等癥狀。本病一年四季均可發(fā)生,以冬季多發(fā),病犬是主要的傳染原,犬可通過呼吸道、消化道、糞便及污  染物傳染。該病一但發(fā)生,同窩犬同室犬很難控制均可造成感染。幼犬死亡率較  高,對幼犬的危害較大。最近的研究發(fā)現(xiàn) CCoV 感染的宿主范圍有不斷擴大的趨勢,許多野生動物如虎、獅、大熊貓、小熊貓、水紹也可感染。本產(chǎn)品就是以探針  法熒光定量RT-PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測犬冠狀病毒的試劑盒,它具有下列特點:

1.       即開即用,用戶只需要提供樣品 RNA 模板。

2.       引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。

3.       提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。

4.       特異性高,引物是根據(jù)犬冠狀病毒高度保守區(qū)設(shè)計,不會跟其他病毒的 RNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。

5.       本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。

6.       本產(chǎn)品只能用于科研。


【試劑組成】

成分

十孔盒包裝

探針法 qRT-PCR 緩沖液

500μL黃蓋)

探針法 qRT-PCR 酶混合液

100μL紅蓋)

熒光 PCR 專用模板稀釋液

1 mL(黃蓋)

犬冠狀病毒探針法 qRT-PCR 引物

混合液

100 μL白蓋)

犬冠狀病毒 qRT-PCR 探針

50 μL棕色管)

犬冠狀病毒探針法 qRT-PCR 陽性

對照(1×10E8 拷貝/μL)

50 μL黃蓋

使用手冊

1



【運輸及保存】低溫運輸,-20℃保存,保存期限為 12 個月。

【自備試劑】樣品 RNA。

【注意事項】

一、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能

1.    污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原, 本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

2.    用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 RT-PCR 專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同)。

3.    在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

4.    換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

5.    換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

6.    重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 RNA 的制備

7.    如果有 N 個樣品,最好設(shè)置 N+2 個提取,多出的一個是 PC(樣品制備陽性對照),一個是 NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?10μL 陽性對照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為 NC。

8.    用自選方法純化樣品的 RNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容。

Probe qRT-PCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進行)

9.    如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于 PCR 陽性對照(用第 4 號管的陽性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

10.    在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)  置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好  后最后加):

成分

樣品管N+2

RT-PCR

陰性對照

標準曲線樣品管

2-7 管)

探針法 qRT-PCR 緩沖液

10 μL

10 μL

10 μL

探針法 qRT-PCR 酶混合液

2 μL

2 μL

2 μL

犬冠狀病毒 qRT-PCR 探針

1 μL

1 μL

1 μL

犬冠狀病毒探針法 qRT-PCR 引物

混合液

2 μL

2 μL

2 μL

待測樣品 RNA 模板

5 μL

-

-

超純水

-

5 μL

-

7 步所得標準曲線樣品稀釋液

2-7 號)

-

-

5 μL2 樣到 2 號管,

3 號樣到 3













11.  蓋上蓋子后上機

五、數(shù)據(jù)處理

12.  如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 C 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品RNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

13.  如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴增曲線,Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實驗的 C

值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 35,則為陽性。


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