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口蹄疫病毒O、A、Asia-I型PCR檢測試劑盒

簡要描述:口蹄疫病毒O、A、Asia-I型PCR檢測試劑盒利用實時熒光PCR原理,定性檢測口蹄疫O、A、Asia-I型病毒,對口蹄疫O、A、Asia-I型病毒引起的偶蹄獸類病的診斷和監(jiān)控具有重要指導(dǎo)意義。

  • 更新時間:2024-07-18
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 生產(chǎn)地址:上海
  • 訪  問  量:238

詳細(xì)介紹

品牌YLKBIO貨號YLK10388P
規(guī)格48T供貨周期現(xiàn)貨
主要用途科研實驗應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè)
保存條件避光-20℃以下保存有效期12個月
試劑盒說明不同批號的試劑盒組分不可交互使用

口蹄疫病毒O、A、Asia-I型PCR檢測試劑盒


產(chǎn)品名稱:口蹄疫病毒O、A、Asia-I型PCR檢測試劑盒

英文名稱:Foot and Mouth Disease Virus(O、A、Asia-I)Detection Kit (Triple Channels Real-Time PCR Method)

本試劑盒利用實時熒光PCR原理,定性檢測口蹄疫O、A、Asia-I型病毒,對口蹄疫O、A、Asia-I型病毒引起的偶蹄獸類病的診斷和監(jiān)控具有重要指導(dǎo)意義。

本試劑盒針對口蹄疫O、A、Asia-I型病毒的高度保守區(qū)域設(shè)計特異性引物和探針,在反應(yīng)體系中含口蹄疫O、A、Asia-I型病毒基因組模板的情況下,PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應(yīng)通道信號進(jìn)行實時監(jiān)測和輸出,實現(xiàn)檢測結(jié)果的定性分析。


【試劑組成】

序號

組成

50T/

B

FMDV- O、A、Asia-I RT-PCR反應(yīng)液

750 μL×1

FMDV- O、AAsia-I逆轉(zhuǎn)錄酶

100 μL×1

FMDV- O、AAsia-I Taq

150 μL×1

FMDV- O、A、Asia-I陽性對照

 40   μL×1

FMDV- O、AAsia-I陰性對照

 40   μL×1

蛋白酶K

1.2ml×1

擴(kuò)增試劑盒說明書

1

注:陰性對照為偶蹄獸類基因組DNA,陽性對照為失去活性的口蹄疫O、A、Asia-I型病毒cDNA。


【儲存條件及有效期】



避光-20℃以下保存,避免反復(fù)凍融,有效期12個月。


【適用儀器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀。


【樣本要求】

1.  新鮮采集的咽/拭子、皰疹液和糞便標(biāo)本,并使用滅菌生理鹽水懸浮。

2.應(yīng)避免標(biāo)本間交叉污染。

3.標(biāo)本收集后可立即檢測;若不能立即檢測,可置于2~8℃冷藏過夜保存;如需長期保存,標(biāo)本應(yīng)凍存于-80℃以下,避免反復(fù)凍融。


【使用方法】

1.  試劑準(zhǔn)備(試劑準(zhǔn)備區(qū))

(1)從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑,充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。

(2)核算當(dāng)次實驗所需要的反應(yīng)數(shù)(n),并根據(jù)如下表所示反應(yīng)體系計算當(dāng)次實驗所需要的各種試劑量。

n =陰性對照數(shù)(1T)+陽性對照數(shù)(1T)+誤差預(yù)留量(1T)+樣本數(shù)

單反液配制表(每份)

RT-PCR反應(yīng)液

15.0 μL

逆轉(zhuǎn)錄酶

 2.0 μL

Taq

 3.0 μL




 (3)在無菌離心管中加入上述試劑,充分混勻后瞬時離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應(yīng)管。

2.樣本準(zhǔn)備(樣本處理區(qū))

具體操作按照其試劑盒說明書操作。

3.加樣

在上述制備好的PCR反應(yīng)樣本管中分別加入處理好的待測標(biāo)本RNA各5 μl、終體積25 μl/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5 μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品,終體積為25 μl/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。

4. PCR(PCR擴(kuò)增區(qū))

(1)取樣本處理區(qū)準(zhǔn)備好的PCR反應(yīng)管,放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應(yīng)位置,并記錄放置順序。

(2)按下表設(shè)置儀器核酸擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

 

反應(yīng)體積

25 μL

通道選擇

FAM通道采集 FMDV-O病毒熒光信號

HEX通道采集 FMDV-A病毒熒光信號

ROX通道采集 FMDV-Asia-I病毒熒光信號

 PCR

反應(yīng)

條件

步驟

條件

循環(huán)數(shù)

反轉(zhuǎn)錄

 42℃10分鐘(min

1

預(yù)變性

95℃3分鐘(min

1

預(yù)擴(kuò)增

95℃5秒(s

5

55℃40秒(s

PCR擴(kuò)增

95℃5秒(s

40

55℃40秒(s

(此階段結(jié)束時采集熒光信號)











注:ABI系列熒光PCR儀在設(shè)置時不選ROX校正,設(shè)置淬滅基團(tuán)選擇None。

【參考值(參考范圍)】

1.試劑盒有效性判定:

 (1)陽性對照:有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤35。

 (2)陰性對照:Ct值>38或無Ct值,線形為直線或輕微斜線,無指數(shù)增長期。

2.標(biāo)本結(jié)果判定:

(1)陽性:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。

(2)可疑:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值在35~38范圍內(nèi)。此時應(yīng)對標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測,如重復(fù)實驗結(jié)果Ct值仍在35~38范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增長期,則判定為陽性,否則為陰性。

(3)陰性:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值>38或無Ct值。

【檢驗結(jié)果的解釋】

通道及檢測結(jié)果

標(biāo)本檢測結(jié)果解釋

FAM

HEX

ROX

+

+

+

標(biāo)本檢出口蹄疫病毒O、A、Asia-I RNA

+

+

-

標(biāo)本檢出口蹄疫病毒O、A RNA,未檢出Asia-I RNA

+

-

+

標(biāo)本檢出口蹄疫病毒O、Asia-I RNA,未檢出A RNA

-

+

+

標(biāo)本檢出口蹄疫病毒A、Asia-I RNA,未檢出A RNA

+

-

-

標(biāo)本檢出口蹄疫病毒O RNA,未檢出AAsia-I RNA

-

+

-

標(biāo)本檢出口蹄疫病毒A RNA,未檢出OAsia-I RNA

-

-

+

標(biāo)本檢出口蹄疫病毒Asia-I RNA,未檢出OA RNA

-

-

-

標(biāo)本中未檢出口蹄疫病毒O、AAsia-I RNA

【檢驗方法的局限性】

1.  當(dāng)檢測樣本中被檢核酸濃度低于本試劑盒的Z低檢出xian時可能會發(fā)生假陰性的結(jié)果。

2.  被檢樣本在采集、運輸、儲存以及處理過程中操作方式不當(dāng)容易造成RNA降解而產(chǎn)生假陰性結(jié)果。

3.  樣本在采集、運輸、儲存以及處理過程中發(fā)生交叉污染,則容易得到假陽性結(jié)果。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 產(chǎn)品的Z低檢出限為102 Copies/mL,產(chǎn)品CV值≤5%。

【注意事項】

1.  整個檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實驗服、儀器、耗材應(yīng)獨立使用,不能混用;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。

2.  為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機(jī)檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。

3.  每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。

4.  試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時離心。

5.  試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨存放。

6.  為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。

7.  儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號試劑不能混用。

8.  ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。

9.  實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。

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