簡要描述:人可溶性粘附分子(Sam)ELISA試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中可溶性粘附分子(Sam)的含量。
詳細(xì)介紹
品牌 | YLKBIO | 貨號 | YLK-4866E |
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規(guī)格 | 96T/48T | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 科研實(shí)驗(yàn) | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
樣本 | 血清、血漿及相關(guān)液體樣本 | 適用物種 | 人、大鼠、小鼠、植物、動物等 |
檢測方法 | 雙抗體夾心法 | 保存條件 | 2-8℃ |
有效期 | 6個(gè)月 |
人可溶性粘附分子(Sam)ELISA試劑盒
(ELISA) 使用說明書
?人可溶性粘附分子(Sam)ELISA試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中可溶性粘附分子(Sam)的含量。
? 有效期:6個(gè)月
? 保存條件:2-8℃
? 本試劑盒僅供科研使用,不得用于臨床診斷
實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)
人可溶性粘附分子(Sam)試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知待測物質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將待測物質(zhì)和生物/素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系。
試劑盒組成
需要而未提供的試劑和器材
1. 酶標(biāo)儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
樣品收集、處理及保存方法
1)血清 操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后1000×g 離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2)血漿 EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g 離心 30 分鐘去除顆粒。
3)細(xì)胞上清液 1000×g 離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4)組織勻漿 將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g 離心 10 分鐘,取上清液
5)保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在 37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
注:標(biāo)本溶血會影響最后檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。
備注:
1. 標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:80、40、20、10、5、2.5 U/L
2. 經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),實(shí)驗(yàn)過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí),可用樣本/稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
試劑準(zhǔn)備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
操作步驟
1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回 4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL;
3. 樣本孔中加入待測樣本 50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置 1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板 5 次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL,37℃避光孵育 15min。
7. 每孔加入終止液 50μL,15min 內(nèi),在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。
試劑盒安全性
1)避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
2)實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3)不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算
以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計(jì)算出樣品的濃度。
注意事項(xiàng)
1)試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
2)實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
3)不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4)使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6)洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7)底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8)加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
9)按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
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