簡要描述:人結(jié)締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)ELISA試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中結(jié)締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)的含量。
詳細介紹
品牌 | YLKBIO | 貨號 | YLK-4846E |
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規(guī)格 | 96T/48T | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 科研實驗 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
樣本 | 血清、血漿及相關(guān)液體樣本 | 適用物種 | 人、大鼠、小鼠、植物、動物等 |
檢測方法 | 雙抗體夾心法 | 保存條件 | 2-8℃ |
有效期 | 6個月 |
人結(jié)締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)ELISA試劑盒
(ELISA) 使用說明書
?人結(jié)締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)ELISA試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中結(jié)締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)的含量。
? 有效期:6個月
? 保存條件:2-8℃
? 本試劑盒僅供科研使用,不得用于臨床診斷
實驗原理實驗
人結(jié)締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知待測物質(zhì)濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將待測物質(zhì)和生物/素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系。
試劑盒組成
需要而未提供的試劑和器材
1. 酶標儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
樣品收集、處理及保存方法
1)血清 操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后1000×g 離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2)血漿 EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g 離心 30 分鐘去除顆粒。
3)細胞上清液 1000×g 離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4)組織勻漿 將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g 離心 10 分鐘,取上清液
5)保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在 37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
注:標本溶血會影響最后檢測結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
備注:
1. 標準品濃度依次為:80、40、20、10、5、2.5 U/L
2. 經(jīng)過大量正常標本檢驗,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時,可用樣本/稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。
試劑準備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
操作步驟
1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回 4℃。
2. 設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL;
3. 樣本孔中加入待測樣本 50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置 1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板 5 次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL,37℃避光孵育 15min。
7. 每孔加入終止液 50μL,15min 內(nèi),在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。
試劑盒安全性
1)避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
2)實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3)不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
實驗結(jié)果計算
以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。
注意事項
1)試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,不可保存。
2)實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
3)不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4)使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6)洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。
7)底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8)加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
9)按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
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