大鼠視乳頭星形膠質(zhì)細胞
產(chǎn)品名稱 :大鼠視乳頭星形膠質(zhì)細胞
產(chǎn)品貨號 :YLK-XB1173h
組織來源 :眼球
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介:
視乳頭星形膠質(zhì)細胞分離自視神經(jīng)乳頭。視乳頭位于黃斑區(qū)鼻側(cè)附近,境界清楚,呈白色、圓盤狀,因此也稱為視盤。視網(wǎng)膜上視覺纖維在此匯集,并于此穿出眼球向視中樞傳遞。視乳頭中央有一小凹陷區(qū),稱為視杯或生理凹陷。視乳頭是視神經(jīng)纖維聚合組成視神經(jīng)的起始端,它沒有視細胞,因而沒有視覺,在視野中是生理盲點。視乳頭是開角型青光眼最早受損的部位,星形膠質(zhì)細胞是視神經(jīng)乳頭處主要的膠質(zhì)細胞類型,可為視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞無髓鞘的軸突提供結(jié)構(gòu)和生物支持。
青光眼視神jing病變是全球shou位不可逆性致肓眼病。青光眼視神jing病變以視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞軸突喪失并伴有視乳頭處細胞外基質(zhì)重坦為主要特征。
導致視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞喪失的病理生理機制尚未wan全闡明,神經(jīng)膠質(zhì)細胞對調(diào)控神經(jīng)元微環(huán)境起多重作用,越來越多的證據(jù)表明膠質(zhì)細胞町能對神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、損傷、修復及再生起極為關(guān)鍵的作用。視乳頭星形膠質(zhì)細胞胞體多扁平,體積較大,形狀多呈不規(guī)則的多邊形,突起較粗,胞核為橢圓形,核仁清晰可見,核周有較密集物質(zhì),胞質(zhì)稀疏,骨架結(jié)構(gòu)良好,明顯不同于長梭形的成纖維細胞形態(tài)。
質(zhì)量檢測
優(yōu)利科生物實驗室分離的該細胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 :含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長特性 :貼壁
細胞形態(tài) :梭形、多角形
傳代特性 :可傳2-3代
傳代比例 :1:2
消 化 液 :0. 25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 :氣相 :空氣,95% 。C O2,5%
該細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白/酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補充新鮮的完培至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液,1000rpm,離心5min,保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,用5ml完培基重懸沉淀,接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
4) 待細胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預熱)。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰/酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和公司技術(shù)部溝通。由于運輸?shù)脑?,個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。