小鼠胃平滑肌細(xì)胞
產(chǎn)品名稱 :小鼠胃平滑肌細(xì)胞
產(chǎn)品貨號 :YLK-XB0934h
組織來源 :胃組織
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡介:
胃平滑肌細(xì)胞分離自胃組織。胃柔軟,活體呈橘紅色。胃空虛時形成許多皺襞,充盈時變平坦。胃壁由粘膜、粘膜下膜、肌膜和漿膜四層構(gòu)成。粘膜上皮為柱狀上皮。上皮向粘膜深部下陷構(gòu)成大量腺體(胃底腺、賁門腺、幽門腺) ,它們的分泌物混合形成胃液,對食物進(jìn)行化學(xué)性消化。粘膜在幽門處由于覆蓋幽門括約肌的表面而形成環(huán)狀的皺襞叫幽門瓣。胃肌膜由三層平滑肌構(gòu)成,外層縱形,中層環(huán)形,內(nèi)層斜行,其中環(huán)形肌Z發(fā)達(dá),在幽門處特別增厚形成幽門括約肌。
胃平滑肌細(xì)胞源自胃的平滑肌層,細(xì)胞通過緊密連接,進(jìn)行同步性運(yùn)動,完成肌肉的舒縮活動,以推動食物前進(jìn),完成對食物的機(jī)械性消化,并促進(jìn)化學(xué)性消化和吸收。胃平滑肌具有肌組織的共同特性,如興奮、自律性、傳導(dǎo)性和收縮性,在離體后,置于適宜的環(huán)境內(nèi),仍能進(jìn)行良好的節(jié)律性運(yùn)動,但其收縮很緩慢,節(jié)律性遠(yuǎn)不如心肌規(guī)則。胃平滑肌對電刺激較不敏感,但對于牽張、溫度和化學(xué)刺激則特別敏感,輕微的刺激??梢饛?qiáng)烈的收縮。胃平滑肌的這一特性是與它所處的生理環(huán)境分不開的,胃內(nèi)容物對平滑肌的牽張、溫度和化學(xué)刺激是引起內(nèi)容物推進(jìn)或排空的自然刺激因素。
細(xì)胞特性
1)組織來源于實驗動物的正常胃組織。
2)細(xì)胞鑒定:平滑肌肌動蛋白(α-SMA)免疫熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長方式:長梭形細(xì)胞,不規(guī)則細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
質(zhì)量檢測
優(yōu)利科生物實驗室分離的該細(xì)胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 :含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長特性 :貼壁
細(xì)胞形態(tài) :成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 :可傳1-2代
傳代比例 :1:2
消 化 液 :0. 25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 :氣相:空氣,95% 。C O2,5%
該細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
客戶收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白/酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完培至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液,1000rpm,離心5min,保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,用5ml完培基重懸沉淀,接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱)。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實驗
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實驗器皿進(jìn)行包被,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰/酶消化時間不宜過長,否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和公司技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?,個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。