小鼠神經干細胞
產品名稱 ：小鼠神經干細胞
產品貨號 ：YLK-XB0841h
組織來源 ：腦組織
產品規(guī)格 ：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介：
神經干細胞分離自腦皮層組織。大腦分左右兩個半球，大腦皮質(灰質) 覆蓋著每個大腦半球的大部分，它是神經元胞體集中的地方。內部則是由神經纖維或髓鞘構成的白質。每一個半球都有三個面，即外側面(約占整個皮質面積的1/3) 、內側面和底面(占2/3的面積) 。半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積。大腦外側面重要的溝、裂有大腦外側裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔，使大腦皮質組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。
神經干細胞具有分化為神經神經元、星形膠質細胞和少突膠質細胞的能力，能自我更新，并足以提供大量腦組織細胞的細胞群。神經干細胞是一類具有分裂潛能和自更新能力的母細胞，它可以通過不對等的分裂方式產生神經組織的各類細胞。需要強調的是，在腦脊髓等所有神經組織中，不同的神經干細胞類型產生的子代細胞種類不同，分布也不同。神經干細胞作為干細胞的一種，它具有其它所有干細胞的基本特征 ：具有自我維持和自我更新能力，具有多種分化潛能，具有分化為本系統(tǒng)大部分類型細胞的能力，這種自我更新和分化潛能可以維持相當長的時間甚至終生，對損傷和疾病具有反應能力。
神經干細胞在疾病、損傷狀態(tài)下具有增殖、遷移，并向神經細胞、星形膠質細胞和少突膠質細胞分化的能力，已成為神經系統(tǒng)損傷修復和再生研究的熱點，體外建立穩(wěn)定的神經干細胞培養(yǎng)模型是其基礎和臨床應用的前提。神經干細胞在培養(yǎng)3-4d后，可形成神經球，神經球在培養(yǎng)基中呈懸浮生長，予以更換半量培基，1周后用吸管輕柔吹打球形克隆成為小的神經球和單細胞懸液，將部分細胞接種到新的培養(yǎng)瓶中，2×105個細胞/瓶，每7-10d傳代1次，每隔3d離心更換半量培養(yǎng)基1次，培養(yǎng)條件不變。
質量檢測
優(yōu)利科生物實驗室分離的該細胞經Vim entin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 ：含B-27 Supplem ent、EG F、bFG F、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：懸浮
細胞形態(tài) ：球形
傳代特性 ：可傳2-3代
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白/酶，A ccutase
培養(yǎng)條件 ：氣相 ：空氣，95% 。C O2，5%
該細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白/酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的完培至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內加入5ml完培終止消化。
3) 經1000rpm離心5min丟棄上清，用5ml完培基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內。
4) 待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預熱)。
5) 原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰/酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和公司技術部溝通。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
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