小鼠心肌細(xì)胞
產(chǎn)品名稱 :小鼠心肌細(xì)胞
產(chǎn)品貨號(hào) :YLK-XB0787h
組織來源 :心臟組織
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
心肌細(xì)胞分離自心臟組織。心臟是脊椎動(dòng)物身體中最重要的一個(gè)器官,主要功能是為血液流動(dòng)提供壓力,把血液運(yùn)行至身體各個(gè)部分。心臟由心肌構(gòu)成,左心房、左心室、右心房、右心室四個(gè)腔組成。左右心房之間和左右心室之間均由間隔隔開,故互不相通,心房與心室之間有瓣膜(房室瓣) ,這些瓣膜使血液只能由心房流入心室,而不能倒流。心臟的作用是推動(dòng)血液流動(dòng),向器官、組織提供充足的血流量,以供應(yīng)氧和各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),并帶走代謝的終產(chǎn)物(如二氧化碳、無機(jī)鹽、尿素和尿酸等) ,使細(xì)胞維持正常的代謝和功能。心肌細(xì)胞呈菱形、多邊形等不規(guī)則形狀。
細(xì)胞培養(yǎng)2h后開始貼壁,呈梭形。到12h左右,細(xì)胞開始伸出偽足,呈菱形、多角形。細(xì)胞分離培養(yǎng)48h以后,大部分伸出偽足、呈巴掌狀,部分心肌細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)搏動(dòng)。心肌細(xì)胞為終末分化細(xì)胞,在體外不增殖。體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞可保持結(jié)構(gòu)及功能上的某些特點(diǎn),并具有自發(fā)性節(jié)律搏動(dòng),且心肌細(xì)胞的培養(yǎng)具有簡(jiǎn)便、定量、重復(fù)性好以及不受神經(jīng)體液因素的影響等特點(diǎn)。利用培養(yǎng)的心肌細(xì)胞在探索非血液動(dòng)力學(xué)因素所致的心肌肥厚的調(diào)節(jié),研究心肌細(xì)胞的生物力學(xué)、凋亡、受體下調(diào)、缺血預(yù)處理、信號(hào)通路、對(duì)作用于心臟的新藥進(jìn)行篩選并對(duì)其安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)以及從培養(yǎng)的心肌細(xì)胞中提取有價(jià)值的生物因子等方面具有廣闊的應(yīng)用前景,對(duì)于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。
細(xì)胞特性
1)組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常心臟組織。本細(xì)胞為終末分化細(xì)胞,增殖能力很弱,建議客戶收到細(xì)胞后直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),不要進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)。
2)細(xì)胞鑒定:肌球蛋白重鏈(MHC)免疫熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式:長(zhǎng)柱狀細(xì)胞,不規(guī)則細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
質(zhì)量檢測(cè)
優(yōu)利科生物實(shí)驗(yàn)室分離的該細(xì)胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 :PLL(0. 1m g/ml)
培 養(yǎng) 基 :含F(xiàn)BS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 :每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 :貼壁
細(xì)胞形態(tài) :梭形、多角形
傳代特性 :屬于終末分化細(xì)胞。屬于不增殖細(xì)胞群
傳代比例 :不傳代
消 化 液 :0. 25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 :氣相 :空氣,95% 。C O2,5%
該細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用優(yōu)利科生物配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
客戶收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白/酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完培至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液,1000rpm,離心5min,保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,用5ml完培基重懸沉淀,接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱)。
5) 原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時(shí),需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請(qǐng)注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰/酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和公司技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?,個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。