人骨髓造血干細(xì)胞
產(chǎn)品名稱(chēng) :人骨髓造血干細(xì)胞
產(chǎn)品貨號(hào) :YLK-XB0720h
組織來(lái)源 :骨髓組織
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
骨髓造血干細(xì)胞分離自骨髓;骨髓是機(jī)體的造血組織,位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動(dòng)物的骨髓分兩種:紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細(xì)胞、血小板和各種白細(xì)胞。血小板有止血作用,白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體,包括細(xì)菌、病毒等;某些淋巴細(xì)胞能制造抗體。因此,骨髓不但是造血器官,它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長(zhǎng)骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,是一種海綿狀的組織,能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色,稱(chēng)為紅骨髓。出生時(shí),紅骨髓充滿(mǎn)全身骨髓腔,隨著年齡增大,脂肪細(xì)胞增多,相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代,最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。
造血干細(xì)胞具有自我更新能力并能分化為各種血細(xì)胞的前提細(xì)胞,最終生成各種血細(xì)胞成分,包括紅細(xì)胞,白細(xì)胞和血小板。造血干細(xì)胞需要根據(jù)機(jī)體的生理需求適時(shí)的補(bǔ)充血液系統(tǒng)各個(gè)成熟細(xì)胞組分。同時(shí)在損傷、炎癥等應(yīng)激狀態(tài)下,造血干細(xì)胞也扮演著調(diào)節(jié)和維持體內(nèi)血液系統(tǒng)各個(gè)細(xì)胞組分的生理平衡的角色。臨床治療中,造血干細(xì)胞移植廣泛應(yīng)用于血液系統(tǒng)疾病以及自身免疫疾病,在其它實(shí)體瘤的治療中,比如淋巴瘤,生殖細(xì)胞瘤,乳腺癌,小細(xì)胞肺癌,主要應(yīng)用于常規(guī)治療失敗或復(fù)發(fā)難治以及具有不良預(yù)后因素的患者。
造血干細(xì)胞以不對(duì)稱(chēng)有絲分裂方式進(jìn)行增殖,一個(gè)干細(xì)胞分裂產(chǎn)生兩個(gè)子細(xì)胞,一個(gè)分化為造血祖細(xì)胞,另一個(gè)則保持干細(xì)胞特征。造血干細(xì)胞在不斷體外培養(yǎng)產(chǎn)生大量造血祖細(xì)胞同時(shí),保持自己既不增殖也不分化。體外培養(yǎng)微環(huán)境合適,造血干細(xì)胞可持續(xù)維持培養(yǎng) 60 天左右。 造血干細(xì)胞體外增殖培養(yǎng)需要基質(zhì)細(xì)胞滋養(yǎng)(滋養(yǎng)層細(xì)胞),缺 少滋養(yǎng)層細(xì)胞不增殖,無(wú)法長(zhǎng)期培養(yǎng),產(chǎn)品為收集培養(yǎng)好的造血干懸浮細(xì)胞灌裝發(fā)貨,不包含滋養(yǎng)層,因此收貨后建議盡快實(shí)驗(yàn)。
質(zhì)量檢測(cè)
優(yōu)利科生物實(shí)驗(yàn)室分離的該細(xì)胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 : 含F(xiàn)BS、SC F、IL-3、TPO 、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 : 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 : 懸浮
細(xì)胞形態(tài) : 圓形
傳代特性 : 不建議傳代
培養(yǎng)條件 : 氣相:空氣,95% ;C O2,5%
客戶(hù)收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白/酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完培至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液,1000rpm,離心5min,保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,用5ml完培基重懸沉淀,接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱)。
5) 原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時(shí),需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn)。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴(lài)氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細(xì)胞種類(lèi)而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中,胰/酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。
4. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和公司技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑?,個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪(fǎng)直至問(wèn)題得到解決