人卵巢微血管內(nèi)皮細(xì)胞
產(chǎn)品名稱 :人卵巢微血管內(nèi)皮細(xì)胞
產(chǎn)品貨號(hào) :YLK-XB0694h
組織來源 : 卵巢組織
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡介:
卵巢微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自卵巢組織;卵巢是雌性動(dòng)物的生殖器官,卵巢的功能是產(chǎn)生卵以及類固醇激素。卵巢的位置與睪丸相同,僅左側(cè)發(fā)育(右側(cè)已退化),呈葡萄狀,均為處于不同發(fā)育時(shí)期的卵泡,卵泡呈黃色,卵巢表面密布血管。卵巢的大小與年齡和產(chǎn)卵期有關(guān)。大多數(shù)脊椎動(dòng)物有兩個(gè)卵巢,但是部分魚類的兩個(gè)卵巢融合為單個(gè)結(jié)構(gòu),而所有鳥類只有左側(cè)卵巢有機(jī)能。
卵巢是位于子宮兩側(cè)的一對(duì)卵圓形的生殖器官,它的外表有一層上皮組織,其下方有薄層的結(jié)締組織。卵巢的內(nèi)部結(jié)構(gòu)可分為皮質(zhì)和髓質(zhì)。皮質(zhì)位于卵巢的周圍部分,主要由卵泡和結(jié)締組織構(gòu)成;髓質(zhì)位于中央,由疏松結(jié)締組織構(gòu)成,其中有許多血管、淋巴管和神經(jīng)。微血管又稱毛細(xì)血管。分布于各種組織和細(xì)胞間的最微細(xì)的血管。介于微動(dòng)脈和微靜脈之間。平均直徑7~9微米,數(shù)量極多,成網(wǎng)狀分布。管壁由一層內(nèi)皮細(xì)胞及一薄層基膜組成,厚約0.5微米?;ね饷嬗斜咏Y(jié)締組織,其中有纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和周細(xì)胞等。
最細(xì)的微血管由一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞圍成管腔,較粗的微血管由2~3個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞圍成。分布于肌肉組織、神經(jīng)組織和結(jié)締組織中的微血管,內(nèi)皮細(xì)胞間為縫隙連接(縫隙寬150埃),稱連續(xù)微血管。血管內(nèi)皮細(xì)胞在器官和組織的結(jié)構(gòu)和功能上起著非常重要的作用。并與多種疾病的發(fā)生與發(fā)展有關(guān)。近年來血管內(nèi)皮細(xì)胞在炎癥、休克等一系列病理生理改變中的重要性愈來愈受到人們的重視。研究發(fā)現(xiàn),不同來源的內(nèi)皮細(xì)胞在生物學(xué)特征、結(jié)構(gòu)和功能等方面均存在一定差別,而同是微血管內(nèi)皮細(xì)胞,它們又存在器官和組織的特異性。
質(zhì)量檢測
優(yōu)利科生物實(shí)驗(yàn)室分離的該細(xì)胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 : PLL(0.1m g/ml),明膠(0.1%)
培 養(yǎng) 基 : 含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 : 每2-3天換液一次
生長特性 : 貼壁
細(xì)胞形態(tài) : 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 : 可傳3代左右
傳代比例 : 1:2
消 化 液 : 0. 25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 : 氣相:空氣,95% ;C O2,5%
客戶收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1) 吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白/酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完培至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1) 收集所有細(xì)胞懸液,1000rpm,離心5min,保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,用5ml完培基重懸沉淀,接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
4) 待細(xì)胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預(yù)熱)。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時(shí),需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因沒貼好影響實(shí)驗(yàn)。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰/酶消化時(shí)間不宜過長,否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和公司技術(shù)部溝通。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時(shí)和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決