簡(jiǎn)要描述:杏仁源性成分探針?lè)晒舛縋CR試劑盒可用于檢測(cè)食品或其他材料中是否有杏仁源性成分?,F(xiàn)代食品加工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性,因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術(shù)已經(jīng)無(wú)法對(duì)食材的真?zhèn)芜M(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定。同時(shí)部分食材還有致敏性,因此基于基因檢測(cè)的快速靈敏的食材來(lái)源檢測(cè)技術(shù)將對(duì)食品監(jiān)管和安全提供重要的保障。
詳細(xì)介紹
品牌 | YLKBIO | 貨號(hào) | YLK10353P |
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規(guī)格 | 50T | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 科研 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
中文名稱(chēng) | 杏仁源性成分探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 | 英文名稱(chēng) | Amygdaline-Derived?Material?Probe?qPCR?Kit |
保存條件 | -20℃保存 | 有效期 | 12個(gè)月 |
自備試劑 | 樣品 DNA |
中文名稱(chēng):杏仁源性成分探針?lè)晒舛縋CR試劑盒。
英文名稱(chēng):Amygdaline-Derived Material Probe qPCR Kit。
產(chǎn)品及特點(diǎn):
本試劑盒可用于檢測(cè)食品或其他材料中是否有杏仁源性成分?,F(xiàn)代食品加工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性,因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術(shù)已經(jīng)無(wú)法對(duì)食材的真?zhèn)芜M(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定。同時(shí)部分食材還有致敏性,因此基于基因檢測(cè)的快速靈敏的食材來(lái)源檢測(cè)技術(shù)將對(duì)食品監(jiān)管和安全提供 重要的保障。本公司開(kāi)發(fā)了簡(jiǎn)單快捷的杏仁源性成分探針?lè)晒舛縋CR 檢測(cè)試劑盒,它具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶(hù)只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)杏仁源性成分DNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他物 種的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 既可用于定性檢測(cè),又可用于定量檢測(cè)。用于定量檢測(cè)時(shí)線(xiàn)性范圍至少為5個(gè)數(shù)量級(jí)。
6. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針?lè)晒舛縋C 反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分:
2×Probe qPCR MagicMix :500μL(紅蓋)
熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液:1mL(綠蓋)
超純水:1mL(白蓋)
杏仁源性成分探針?lè)╭PCR引物-探針混合液:150μL(棕色管)
杏仁源性成分探針?lè)╭PCR陽(yáng)性對(duì)照(1×10E7 拷貝/μL):50μL(黃蓋)
使用手冊(cè):1份
運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為12個(gè)月
自備試劑樣品:DNA
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品(以 10E1-10E6 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。 由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供無(wú)傳染性的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為6,5,4,3,2,1。
用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液,最好用帶芯槍?zhuān)峦T?號(hào)管中加入5μL 1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E6 拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。換槍頭,在5號(hào)管中加入5μL 1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所 得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。換槍頭,在4號(hào)管中加入5μL 1×10E5 拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
如果有N個(gè)樣品待提取,最好設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的是PC(樣品制備陽(yáng)性對(duì)照)和NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢匀£?yáng)性對(duì)照的1000倍稀釋液10μL再加上一定量的水,使總體積與待提取樣品的規(guī)定體積一致,以此作為PC。另外用水作為 NC。用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)提取試劑盒兼容。
三、Probe qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
如果做定量分析并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照(用水做模板),6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。如果做定性分析,并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+4 個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照(用水做模板),1個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照(用第4號(hào)管的陽(yáng)性對(duì)照稀釋液做模 板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè) 置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后最后加)
成分/每管 | 樣品管 N+2 個(gè) | PCR 陰性 對(duì)照管 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn) 樣品管(1-6 管) |
2×Probe qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 10 μL |
杏仁源性成分探針?lè)?qPCR 引物-探針混合液 | 3 μL | 3 μL | 3 μL |
N+2 個(gè)待測(cè) DNA 模板 | 7 μL | ||
超純水 | 7 μL | ||
第 6 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品稀釋液 (1-6 號(hào)) | 7 μL(1 號(hào)樣到 1 號(hào)管,2 號(hào)樣到 2 號(hào)管…) |
蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行PCR:
過(guò)程 | 溫度 | 時(shí)間 |
預(yù)變性 | 95℃ | 10 min |
PCR 反應(yīng) (45 個(gè)循環(huán)) | 95℃ | 15 sec |
60℃ | 60 sec(采集 FAM 通道的熒 光信號(hào)) |
四、數(shù)據(jù)處理
如果把本試劑盒用于定量檢測(cè),則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。再以待測(cè)樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上推算出樣品核酸濃度的log值,再推算出其濃度。如果把本試劑盒用于定性檢測(cè),只判斷陽(yáng)性或陰性,則陰性對(duì)照Ct必須大于或等于40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng),有典型擴(kuò)增曲線(xiàn),Ct值應(yīng)該小于或等于37。對(duì)待測(cè)樣品,如果其Ct大于或等于40則為陰性,如果小于或等于37則為陽(yáng)性。如果在37-40之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的Ct值如果大于或等于40則為陰性,如果小于40,則為陽(yáng)性。
杏仁源性成分探針?lè)晒舛縋CR試劑盒僅供科研。
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