簡(jiǎn)要描述:物種鑒定系列中的過(guò)敏原鑒定試劑,可針對(duì)食品中過(guò)敏原成分的特異核酸片段進(jìn)行擴(kuò)增,通過(guò)實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線判定結(jié)果。胡桃源性成分核酸檢測(cè)試劑盒PCR-熒光探針?lè)ㄓ糜谑称吩匣蚣庸な称分羞^(guò)敏原胡桃成分的檢測(cè),檢出限為 0.01%。
詳細(xì)介紹
品牌 | YLKBIO | 貨號(hào) | YLK10351P |
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規(guī)格 | 48T | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 科研 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
中文名稱 | 胡桃源性成分核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)ǎ?/td> | 保存條件 | -20℃保存 |
有效期 | 15個(gè)月 | 檢出限 | 0.01% |
適用儀器 | ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600 等實(shí)時(shí)熒光 PCR 儀 |
物種鑒定系列中的過(guò)敏原鑒定試劑,可針對(duì)食品中過(guò)敏原成分的特異核酸片段進(jìn)行擴(kuò)增,通過(guò)實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線判定結(jié)果。胡桃源性成分核酸檢測(cè)試劑盒PCR-熒光探針?lè)?/strong>用于食品原料或加工食品中過(guò)敏原胡桃成分的檢測(cè),檢出限為 0.01%。
請(qǐng)于-20℃條件下保存,有效期 15 個(gè)月
試劑
A-胡桃源-P :1000μL × 1 支
NG-P :100μL × 2 支
PG-胡桃源-P :100μL × 1 支
適用儀器 ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600 等實(shí)時(shí)熒光 PCR 儀。
自備耗材和儀器 ①冰盒;②移液器(0.5-10μL,10-100μL,100-1000μL)及配套滅菌吸頭;③離心機(jī);④渦旋混勻器;⑤金屬浴。
注意事項(xiàng)
1.本試劑檢測(cè)靈敏度高。為了防止污染,實(shí)驗(yàn)要分區(qū)操作。
1)第一區(qū):試劑準(zhǔn)備區(qū)。
2)第二區(qū):樣本制備區(qū)。
3)第三區(qū):擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)。
★ 分區(qū)之間最好進(jìn)行物理性隔離,避免人為因素造成的污染。
2.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中穿戴工作服和乳膠手套,不同區(qū)域獨(dú)立使用工具,需更換手套和實(shí)驗(yàn)服。
3.嚴(yán)格按照操作步驟操作,試劑配制和加樣等步驟請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書要求在冰盒上操作。
4.反應(yīng)液中的成分對(duì)光敏感,應(yīng)避光保存。試劑使用前要*解凍,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,推薦使用前離心 30 秒,并按檢測(cè)頻次將反應(yīng)液以適當(dāng)體積分管保存。
5.反應(yīng)結(jié)束后,擴(kuò)增管請(qǐng)置于密封袋內(nèi)丟棄,當(dāng)日清理,開蓋易造成氣溶膠污染,禁止開蓋。
6.不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿混合使用,在有效期內(nèi)使用。
樣品處理 參照《SN/T 1961.6-2013 出口食品過(guò)敏原成分檢測(cè) 第 6 部分:實(shí)時(shí)熒光 PCR 方法檢測(cè)胡桃成分》或其他標(biāo)準(zhǔn) 處理樣品,制備的樣本保存待用。 稱取約 200g 樣品,用潔凈研缽或合適的粉碎裝置將樣品粉碎至粉末狀用以提取 DN/A。 樣品的采集和制備是過(guò)敏原成分鑒別的重要步驟,為防止交叉污染,應(yīng)使用一次性消耗品,研缽應(yīng)經(jīng) 160℃干 烤 2 h,其他不宜干烤或高壓處理的器皿應(yīng)使用 1%次氯酸鈉溶液浸泡。其它防止交叉污染的措施按照 GB/T 27403 中的規(guī)定執(zhí)行。
詳細(xì)步驟請(qǐng)按照標(biāo)準(zhǔn)操作。
實(shí)驗(yàn)操作
1. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū),放置于冰盒中進(jìn)行): 若有 N 個(gè)待檢樣品,則參照下表,按照 N+2 個(gè)數(shù)量計(jì)算各組分用量(N 個(gè)待檢樣品+1 個(gè)空白對(duì)照 NG+1 個(gè) 陽(yáng)性對(duì)照 PG),渦旋混勻,離心 30 秒,分裝于 0.2ml PCR 管中。
A-胡桃源-P:20×(N+2)μL
2.模板制備(樣本制備區(qū)) 建議使用植物基因組提取試劑盒或深加工食品 DN/A 提取試劑盒等商品化試劑盒,具體過(guò)程詳見產(chǎn)品說(shuō)明書。 3.添加模板(樣本制備區(qū),放置于冰盒上進(jìn)行) 向步驟 1 每管反應(yīng)液中分別加入 5μL 模板,順序?yàn)?NG、待測(cè)樣品模板、PG-胡桃源-P。蓋好配套的 PCR 管蓋 后,渦旋混勻 30s,離心 1min,立即進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增反應(yīng)。 4.擴(kuò)增反應(yīng)(擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)) 使用熒光定量 PCR 儀,熒光基團(tuán)選擇 FAM,淬滅基團(tuán)選擇 NONE。 按下列條件設(shè)置擴(kuò)增反應(yīng):
5.基線和閾值設(shè)定 基線范圍選擇一般在 6-15 個(gè)循環(huán),如果有強(qiáng)陽(yáng)性樣本,應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整基線范圍。閾值線應(yīng)超過(guò)空白對(duì)照 擴(kuò)增曲線的最高點(diǎn),且 Ct 值不出現(xiàn)任何數(shù)值。
◆ 結(jié)果判定 檢測(cè)樣品 Ct 值≤35,則判定為被檢樣品陽(yáng)性,檢出過(guò)敏原胡桃成分。 檢測(cè)樣品 Ct 值≥40,則判定為被檢樣品陰性,未檢出過(guò)敏原胡桃成分。 檢測(cè)樣品 35<Ct 值<40,則重復(fù)一次。如再次擴(kuò)增后 Ct 值仍為<40.0,則判定為被檢樣品陽(yáng)性,檢出過(guò)敏原 胡桃成分。如再次擴(kuò)增后 Ct 值≥40,則判定為被檢樣品陰性,未檢出過(guò)敏原胡桃成分。 ★ NG 反應(yīng)為平滑直線,PG 反應(yīng)為“S"型擴(kuò)增曲線,此次檢測(cè)結(jié)果有效,否則無(wú)效。如重復(fù)檢測(cè)結(jié)果仍為無(wú)效,請(qǐng)與技術(shù)支持 人員聯(lián)系。
胡桃源性成分核酸檢測(cè)試劑盒PCR-熒光探針?lè)?/strong>僅供科研。
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