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轉(zhuǎn)基因大米Bt(cryAc)熒光PCR試劑盒

簡(jiǎn)要描述:轉(zhuǎn)基因大米Bt(cryAc)熒光PCR試劑盒適用于檢測(cè)氣管分泌物拭子、肺組織等樣本中的轉(zhuǎn)基因大米Bt(cryAc),用于轉(zhuǎn)基因大米Bt(cryAc)感染的輔助診斷,其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

  • 更新時(shí)間:2024-06-27
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 生產(chǎn)地址:上海
  • 訪  問  量:1388

詳細(xì)介紹

品牌YLKBIO貨號(hào)YLK10347P
規(guī)格50T供貨周期現(xiàn)貨
主要用途科研實(shí)驗(yàn)應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè)
中文名稱轉(zhuǎn)基因大米Bt(cryAc)熒光PCR試劑盒英文名稱Transgenic?Rice?Bt?(cryAc)?Fluorescent?PCR?Kit
保存條件-20℃±5℃避光保存有效期12個(gè)月
CryAc反應(yīng)液50μL×1管

轉(zhuǎn)基因大米Bt(cryAc)熒光PCR試劑盒

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱:轉(zhuǎn)基因大米Bt(cryAc)熒光PCR試劑盒

Name  :Transgenic Rice Bt (CryAc) Gene Detection Kit (Real-Time PCRMethod)

 

【包裝規(guī)格】50T/盒

                                                                   

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大米Bt(CryAc)基因,用于篩查待檢測(cè)植物中是否含有CryAc成分。其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

 

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的CryAc特異性引物和探針,用熒光PCR 技術(shù)進(jìn)行轉(zhuǎn)基因成分的檢測(cè)。

 

【試劑組成】

名      稱

  規(guī)      格

酶液

50μL×1管

CryAc反應(yīng)液

1.0mL×1管

 CryAc陽(yáng)性質(zhì)控品

50μL ×1管

陰性質(zhì)控品

250μL ×1管

說(shuō)明:不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。

 

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃避光保存、運(yùn)輸、避免反復(fù)凍融,有效期12個(gè)月。

 

【適用儀器】

ABI 、安捷倫MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf等系列熒光定量PCR檢測(cè)儀。

 

【標(biāo)本采集】

稱取200g樣品。

 

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長(zhǎng)期保存可置-70℃,但不能超過(guò)6個(gè)月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用0℃冰壺。

 

【使用方法】

1. 樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1 樣本前處理

固體樣本:用粉碎機(jī)或冷凍研磨儀將樣品研磨至細(xì)粉狀。

1.2 DNA提取

對(duì)于固體標(biāo)本,DNA的提取可以采用SN/T 2584-2010中推薦的方法:

1) 每個(gè)樣品取2個(gè)平行管。稱取200mg粉碎的樣品,加入1mL預(yù)冷至4℃的抽提液,劇烈搖動(dòng)混勻后,在冰上靜止5min,4℃條件下10000g離心15min,棄上清液;

2) 加入600uL預(yù)熱至65℃的裂解液,充分重懸沉淀,在65℃恒溫保持40min,期間顛倒混勻5次;

3) 室溫條件下10000g離心10min,取上清液轉(zhuǎn)移至新離心管中,加入5uLRNAseA,37℃恒溫30min,分別用等體積苯/酚:異戊醇溶液和三氯jia烷:異戊醇溶液各抽提一次;

4) 室溫條件下,10000g離心10min,取上清液至新離心管,加入三分之二體積的異丙醇,十分之一體積的3mol/L的乙酸鈉溶液(pH=6.5),-20℃放置2-3h;

5) 在4℃條件下,10000g離心15min,棄上清液,用70%乙醇洗滌沉淀一次,倒出乙醇,晾干沉淀;

6) 加入50uL TE(pH8.0)溶解沉淀,所得溶解即為樣品DNA溶液。

也可使用等效的DNA/提取試劑盒。

油脂樣本請(qǐng)直接選用市售油脂DNA/提取試劑盒,按說(shuō)明操作

 

2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù),設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照;樣品每滿7份,多配制1份),每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:

試劑

CryAc反應(yīng)液

酶液

用量

20μL

1μL

 

3. 加樣(樣本處理區(qū))

將步驟1提取的DNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μL,加入相應(yīng)的

反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

 

4. PCR擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))

4.1將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi);

4.2設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為25ul;熒光通道選擇: 檢測(cè)通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)選擇NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:

步驟

循環(huán)數(shù)

溫度

時(shí)間

收集熒光信號(hào)

1

1 cycle

95℃

10min

2

40 cycles

94℃

15sec

55℃

30sec

 

5. 結(jié)果分析判定

5.1 結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置Baseline和Threshold:一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí),根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline的start值(一般可在3~15范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop值(一般可在5~20范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及Threshold的Value值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照),重新分析結(jié)果。

5.2 結(jié)果判斷

陽(yáng)性:檢測(cè)通道Ct值≤35,且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線;
可疑:檢測(cè)通道35<Ct值≤38,建議重復(fù)檢測(cè),如果檢測(cè)通道仍為35<Ct值≤38,且曲線有明顯的增長(zhǎng)曲線,判定為陽(yáng)性,否則為陰性;
陰性:樣本檢測(cè)結(jié)果Ct值>38或無(wú)Ct值。

 

6. 檢測(cè)方法的局限性

? 樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);

? 樣本提取過(guò)程中沒有控制好交叉污染,會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果;

? 陽(yáng)性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果;

? 病原體在流行過(guò)程中基因突變、重組,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

? 不同的提取方法存在提取效率差異,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

? 試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果;

? 本檢測(cè)結(jié)果僅供參考,如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。

 

7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品:Ct>38或無(wú)Ct值顯示;

陽(yáng)性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期,且Ct值≤32;

以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。

 

注意事項(xiàng)

? 所有操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行;

? 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,wan全混勻并短暫離心;

? 反應(yīng)液應(yīng)避光保存;

? 反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

? 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;

? 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;

? 實(shí)驗(yàn)完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器;

試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

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