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豬細(xì)小病毒(PPV)核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)

簡要描述:豬細(xì)小病毒(PPV)核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)適用于檢測腸系膜淋巴結(jié)、肝臟、腎、肺、肝、腦、睪丸、胎盤的肺和淋巴結(jié)、全血等樣本中的豬細(xì)小病毒,用于豬細(xì)小病毒感染的輔助診斷。

  • 更新時間:2024-06-26
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 生產(chǎn)地址:上海
  • 訪  問  量:730

詳細(xì)介紹

品牌YLKBIO貨號YLK10053P
規(guī)格50T供貨周期現(xiàn)貨
主要用途科研實(shí)驗(yàn)應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè)
英文名稱Porcine Parvovirus Detection Kit (Real-Time PCR Me保存條件-20℃±5℃,避光保存
有效期12個月試劑盒說明不同批號的試劑盒組分不可交互使用
標(biāo)本運(yùn)輸采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸

豬細(xì)小病毒(PPV)核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)


通用名稱:豬細(xì)小病毒(PPV)核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)

Name :Porcine Parvovirus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝規(guī)格】50T/盒

【預(yù)期用途】

豬細(xì)小病毒(Porcine parvovirus, PPV)是引起母豬流產(chǎn)和新生仔豬死亡的主要病原體之一,同時也能引起某些皮膚病和腹瀉[1-2],嚴(yán)重影響豬群的健康和正常生產(chǎn),己經(jīng)給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失。本病主要表現(xiàn)為流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和木乃伊胎,母豬通常不表現(xiàn)臨床癥狀。實(shí)時熒光定量 PCR 將常規(guī) PCR 技術(shù)與熒光檢測相結(jié)合,不僅具有敏感性高、特異性強(qiáng)、用時短等優(yōu)點(diǎn),而且通過分析軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析整理,結(jié)果更為準(zhǔn)確直觀, 已成為病原體檢測的重要方法[3]。

本試劑盒適用于檢測腸系膜淋巴結(jié)、肝臟、腎、肺、肝、腦、睪丸、胎盤的肺和淋巴結(jié)、全血等樣本中的豬細(xì)小病毒,用于豬細(xì)小病毒感染的輔助診斷。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采用 TaqMan 探針法實(shí)時熒光 PCR 技術(shù),設(shè)計一對豬細(xì)小病毒特異性引物,結(jié)合一條特異性探針, 用熒光 PCR 技術(shù)對豬細(xì)小病毒的 DNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

包裝規(guī)格

50T/盒

PPV 反應(yīng)液

500μL×2 管

酶液

50μL×1   管

PPV 陽性質(zhì)控品

50μL ×1 管

陰性質(zhì)控品

250μL   ×1 管

說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次,有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

【標(biāo)本采集】

疑似感染仔豬取腸系膜淋巴結(jié)或肝臟;流產(chǎn)或死胎的腎、肺、肝、腦、睪丸和胎盤肺、淋巴結(jié)等組織;待檢   活豬,用注射器取血 5mL

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸, 嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【使用方法】

1.  樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1  樣本前處理

組織樣品:每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g,手術(shù)/剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中,8000rpm 離心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中;全血樣本:待血凝固后,取血清 100μL 于滅菌離心管中。

1.2  核酸提取

推薦采用公司生產(chǎn)的 DNA/提取試劑盒(離心柱提取法),請按照試劑盒說明書進(jìn)行操

作。

2.  試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照;反應(yīng)管數(shù)每滿 10 份,多配制 1 份),每測試反應(yīng)體系配制如下表:

試劑

PPV 反應(yīng)液

酶液

用量(樣本數(shù)為 N)

20μL

1μL

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中,21uL/管。

3.  加樣(樣本處理區(qū))

將步驟 1 提取的核酸、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

 

4.  PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))

4.1  將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);

4.2  設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL;

熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列儀器請勿選擇

ROX 參比熒光,選擇 None 即可。

4.3  推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:


步驟

循環(huán)數(shù)

溫度

時間

收集熒光信號

1

1 cycle

95℃

10min

2

40 cycles

94℃

15sec

55℃

30sec


5.  結(jié)果分析判定

5.1  結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機(jī)器自動分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結(jié)果。

5.2  結(jié)果判斷

陽性:檢測通道 Ct 值≤35,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線;

可疑:檢測通道 35<Ct 值≤38,建議重復(fù)檢測,如果檢測通道仍為 35<Ct 值≤38,且曲線有明顯的增長曲線, 判定為陽性,否則為陰性;

陰性:樣本檢測結(jié)果 Ct 值>38 或無 Ct 值。

6.  質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品:Ct>38 或無 Ct 值顯示;

陽性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期,且 Ct 值≤32; 以上條件應(yīng)同時滿足,否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

7.  檢測方法的局限性

1. 樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);

2. 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;

3. 陽性對照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會導(dǎo)致假陽性結(jié)果;

4. 病原體在流行過程中基因突變、重組,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

5. 不同的提取方法存在提取效率差異,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

6. 試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果;

7. 本檢測結(jié)果僅供參考,如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

【注意事項(xiàng)】

1. 所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行;

2. 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,混勻并短暫離心;

3. 反應(yīng)液應(yīng)避光保存;

4. 反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

5. 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;

6. 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;

7. 實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

8. 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

【參考文獻(xiàn)】

[1]  Mengeling W L. Prevalence of porcine parvovirus induced reproductive; an abattoir study [J]. Am Vet Med Assoc, 1978, 172: 1291-1294.

[2]  Den S. Parvovirus-like particle associated with diarrhea in unweaned piglets [J]. Can Comp Med, 1985, 49: 343-345. [3]殷 震,  劉景華. 動物病毒學(xué)[M] . 2 版.  北京: 科學(xué)出版社, 1997.

[4] 國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局. SN/T 1919-2016 豬細(xì)小病毒病檢疫技術(shù)規(guī)范[S].

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