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土壤植酸酶(phytase)試劑盒說明書

發(fā)布時(shí)間:2023/10/12      點(diǎn)擊次數(shù):253

土壤植酸酶(phytase)試劑盒說明書                                                                                                                                                                                                

微量法100T/48S

 

   :正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義:

植酸酶(phytase)是催化植酸及其鹽類水解為肌醇與磷酸(鹽)的一類酶的總稱,屬磷酸單酯水解酶,它能將食品和飼料中植酸及其鹽轉(zhuǎn)化為可供有機(jī)體利用的有效磷,降低糞便中的磷含量,減輕對(duì)環(huán)境的污染,改善營(yíng)養(yǎng)成分的吸收和利用,因此具有極其廣泛的研究和應(yīng)用價(jià)值。

 

測(cè)定原理:

植酸酶在一定溫度和pH值條件下,水解底物植酸鈉生成無機(jī)磷與肌醇衍生物,無機(jī)磷在酸性環(huán)境中與鉬酸銨顯色劑反應(yīng)生成藍(lán)色復(fù)合物,在700nm處有特征吸收峰,根據(jù)700nm處吸光值變化可計(jì)算得植酸酶活性。

 

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

天平、低溫離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96孔板、恒溫水浴鍋,甲苯(不允許快遞)。

 

試劑的組成和配制:

緩沖液:液體60mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:粉劑×1瓶,4℃避光保存,臨用前加緩沖液30mL配制,現(xiàn)用現(xiàn)配;用不完的試劑4℃保存一個(gè)月。

試劑二:液體15mL×1瓶,4℃保存。

顯色劑:粉劑×6管,4℃避光保存,臨用前根據(jù)用量每瓶加0.4mL雙蒸水溶解,再加1.6mL試劑二混勻。

 

樣本處理:

新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干,過30~50目篩。

 

測(cè)定操作表:


對(duì)照管

測(cè)定管

樣本(g

0.03

0.03

甲苯

20

20

振蕩混勻,室溫放置15min

緩沖液(µL

500


試劑一(µL


500

混勻,37℃孵育24h10000g,4℃離心5min,取上清

上清

100

100

顯色劑(µL

100

100

混勻,靜置15min,測(cè)定700nm處吸光值,△A=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

 

 

酶活性計(jì)算公式:

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.8795x + 0.0084,R2 = 0.9977x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/mL),y為吸光值△A。

酶活性定義:37℃pH5.5的條件下,每克土樣每小時(shí)從5mmol/L的植酸鈉溶液中釋放出1μmol的無機(jī)磷為一個(gè)酶活力單位。

植酸酶活性(μmol/h /g 土樣)=△A-0.0084÷0.8795×V反總÷W÷T

                             =0.82×△A-0.0084

V反總:反應(yīng)總體積,0.52mL;T:反應(yīng)時(shí)間,24hW:樣本質(zhì)量,0.03g。

 

注意事項(xiàng):

1、顯色劑需要臨用前根據(jù)用量配制,每一瓶是10個(gè)樣本的用量,新配制的顯色劑若有顏色則已經(jīng)污染或者試劑過期,應(yīng)放棄使用。

2、ΔA線性范圍為0.01-0.5。


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