土壤蔗糖酶(Solid-Sucrase, S-SC)試劑盒說明書
微量法100管/48樣
注 意 :正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
S-SC能夠水解蔗糖變成相應(yīng)的單糖而被機體吸收,其酶促作用產(chǎn)物與土壤中有機質(zhì)、氮、磷含量,微生物數(shù)量及土壤呼吸強度密切關(guān),是評價土壤肥力的重要指標(biāo)。
測定原理:
S-SC催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖,進一步與3,5-二硝基水楊酸反應(yīng),生成棕紅色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范圍內(nèi)510nm光吸收增加速率與S-SC活性成正比。
自備用品:
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:甲苯1mL×1瓶,4℃保存;(自備)
試劑二:液體7.5mL×1瓶,4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前每瓶加入22mL蒸餾水充分溶解備用;用不完的試劑4℃保存;
試劑四:液體22mL×1瓶,4℃保存。
樣品處理:
新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干,過30~50目篩。
測定步驟和加樣表:
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 |
風(fēng)干土樣(g) | 0.03 | 0.03 |
試劑一(μL) | 5 | 5 |
振蕩混勻,使土樣全部濕潤,37℃水浴15min
試劑二(μL) | 75 | 75 |
試劑三(μL) | 220 | |
蒸餾水(μL) | 220 |
充分混勻,放入37℃水浴培養(yǎng)24小時,10000 g,4℃,離心5min,取上清液
上清液(μL) | 85 | 85 |
試劑四(μL) | 215 | 215 |
充分混勻,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失),流水冷卻,蒸餾水稀釋10倍(可以吸取100μL,加入900μL蒸餾水稀釋;若吸光度大于4,可以加大稀釋倍數(shù)),取200uL至微量石英比色皿或96孔板中510nm處讀吸光值A(chǔ)。計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管需設(shè)一個對照管。
S-SC活性計算:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 4.9x -0.062;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為吸光值。
單位的定義:每天每g土樣中產(chǎn)生1mg 還原糖定義為一個S-SC活力單位。
S-SC活力(mg/d/g 土樣)=( ΔA+0.062) ÷4.9×10×V反總÷W÷T =20.4×(ΔA+0.062)
10:稀釋倍數(shù);T:反應(yīng)時間,1d; V反總:反應(yīng)體系總體積:0.3mL;W:樣本質(zhì)量,0.03g。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 2.45x -0.062;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為吸光值。
單位的定義:每天每g土樣中產(chǎn)生1mg 還原糖定義為一個S-SC活力單位。
S-SC活力(mg/d/g 土樣)=( ΔA+0.062) ÷2.45×10×V反總÷W÷T =40.8×(ΔA+0.062)
10:稀釋倍數(shù);T:反應(yīng)時間,1d; V反總:反應(yīng)體系總體積:0.3mL;W:樣品質(zhì)量,0.03g。
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