土壤脲酶(Solid-Urease,S-UE)測定試劑盒說明書
微量法100管/48樣
注 意 :正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
S-UE能夠水解尿素,產(chǎn)生氨和碳酸。土壤脲酶活性與土壤的微生物數(shù)量、有機(jī)物質(zhì)含量、全氮和速效氮含量呈正相關(guān)。土壤脲酶活性反應(yīng)了土壤的氮素狀況。
測定原理:
利用靛酚藍(lán)比色法測定脲酶水解尿素產(chǎn)生的NH3-N。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:甲苯2mL×1瓶,4℃保存;(自備)
試劑二:粉劑×1瓶,臨用前加入9mL蒸餾水,充分溶解待用,4℃保存;用不完的試劑4℃保存;
試劑三:液體22mL×1瓶,4℃保存;
試劑四A液:液體×1支,4℃保存;試劑四B液:液體×1瓶,4℃保存;臨用前將A液倒入B液中混合,待用;用不完的試劑4℃保存一周;
試劑五:液體2mL×1瓶,4℃保存;
樣品處理:
新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干,過30~50目篩。
測定步驟:
1 、培養(yǎng)
測定管 | 對照管 | |
風(fēng)干土樣(g) | 0.05 | 0.05 |
試劑一(μL) | 20 | 20 |
振蕩混勻,室溫放置15min
試劑二(μL) | 90 | |
蒸餾水(μL) | 90 | |
試劑三(μL) | 190 | 190 |
混勻,放入37℃水浴培養(yǎng)24h后,10000g 25℃離心10min,取上清液。
2、將培養(yǎng)結(jié)束的上清液稀釋10倍(取0.1mL上清液,加入0.9mL蒸餾水)。
3、測氨量(在微量石英比色皿或96孔板中加入下列試劑)
測定管 | 對照管 | |
稀釋后的上清液(μL) | 80 | 80 |
試劑四(μL) | 15 | 15 |
試劑五(μL) | 15 | 15 |
充分混勻,室溫放置20min
蒸餾水(μL) | 90 | 90 |
混勻,于578nm處,蒸餾水調(diào)零,讀吸光值A,計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設(shè)一個對照管。
脲酶活力計算:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.0915x +0.0373;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μg/mL),y為吸光值A。
單位的定義:每天每g土樣中產(chǎn)生1μg NH3-N定義為一個酶活力單位。
脲酶活力(μg/d/g 土樣)=(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反總÷W÷T =656×(ΔA -0.0373)
10:稀釋倍數(shù);T:反應(yīng)時間,1d; V反總:反應(yīng)體系總體積:0.3mL;W:樣本質(zhì)量,0.05g。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.04575x +0.0373;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μg/mL),y為吸光值A。
單位的定義:每天每g土樣中產(chǎn)生1μg NH3-N定義為一個酶活力單位。
脲酶活力(μg/d /g 土樣)=(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V反總÷W÷T =1312×(ΔA -0.0373)
10:稀釋倍數(shù);T:反應(yīng)時間,1d; V反總:反應(yīng)體系總體積:0.3mL;W:樣本質(zhì)量,0.05g。
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