酸性土壤速效磷試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意 :正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
速效磷是土壤中可被植物吸收的磷組分,包括全部水溶性磷、部分吸附態(tài)磷及有機(jī)態(tài)磷,土壤中速效磷是限制植物生長主要因子之一。
測定原理:
用雙酸法提取酸溶性磷和吸附態(tài)磷,用鉬銻抗比色法測定。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、常溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、震蕩儀。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體6mL×1支,4℃保存。
試劑二: 粉劑×1支,4℃避光保存。臨用前加2mL蒸餾水溶解。用不完的試劑4℃保存。
試劑三: 粉劑×3支,4℃避光保存。臨用前加1mL蒸餾水溶解。現(xiàn)配現(xiàn)用。
樣本處理:
新鮮土樣風(fēng)干,過30-50目篩,按照土壤質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g土樣,加入1mL提取液),振蕩提取30min,10000g ,25℃離心10min,取上清液待測。
測定步驟:
1、 取試劑三一支,加入1mL蒸餾水充分溶解待用。
2、 顯色液的配制(可測50個樣):取EP管一支,加入660μL試劑一,再加入100μL試劑二,充分混勻后,再加入240μL試劑三,充分混勻待用;配好的顯色液應(yīng)為黃色,若變藍(lán)則為磷污染;顯色液必須現(xiàn)配現(xiàn)用;若一次性測不了50個樣,可按比例縮小各試劑體積。
3、 操作表
空白管 | 測定管 | |
樣本(μL) | 40 | |
提取液(μL) | 40 | |
顯色液(μL) | 20 | 20 |
H2O(μL) | 140 | 140 |
充分混勻,25℃靜置30min | ||
于微量石英比色皿/96孔板中,蒸餾水調(diào)零,測定660nm處吸光值A,分別記為A空白管和A測定管,△A=A測定管-A空白管??瞻坠苤灰鲆还?。 |
計(jì)算公式:
a. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y =0.1252x-0.0041,R2 = 0.9957,x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/L),y為吸光值。
速效磷含量(mg/kg干重)=(△A+0.0041)÷ 0.1252×V樣÷(W×V樣÷V樣總)
= 7.987×(△A+0.0041)÷W
V樣:樣本體積,0.04mL;V樣總:加入提取液體積,1mL,W:樣本質(zhì)量,約0.1g
b. 用96孔板測定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y =0.0626x-0.0041,R2 = 0.9957,x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/L),y為吸光值。
速效磷含量(mg/kg干重)=(△A+0.0041)÷ 0.0626×V樣÷(W×V樣÷V樣總)
= 15.97×(△A+0.0041)÷W
V樣:樣本體積,0.04mL;V樣總:加入提取液體積,1mL,W:樣本質(zhì)量,約0.1g
注意事項(xiàng):
1. 配好的顯色液當(dāng)天用完,變藍(lán)則不能使用。
2. ΔA線性范圍為:0.01-1.5。
3. 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為:0.1mg/L-20mg/L。
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