類胡蘿卜素(carotenoid)含量試劑盒說明書
微量法100管/96樣
注 意 :正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
類胡蘿卜素是一種脂溶性且具有營養(yǎng)特性的化合物,給植物和動物提供天然色素,是重要的抗氧化劑,并有能力轉(zhuǎn)換為必需維生素。類胡蘿卜素可預(yù)防細胞,組織和基因損毀,增強身體免疫系統(tǒng),抵御感染,減少癌癥風(fēng)險,保護心臟。
測定原理:
樣品通過混合有機溶劑萃取,類胡蘿卜素與非類胡蘿卜素成分分離,在440nm處有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器:
天平、烘箱,100目篩、三角瓶或燒杯、漏斗,紗布、玻璃試管、可見分光光度計/酶標儀。
試劑組成和配制:
試劑一:液體100mL×20瓶,4℃保存。
試劑二:液體100mL×10瓶。4℃保存。
提取液:臨用前可按照試劑一(V):試劑二(V)= 2:1混勻,封口膜封緊,防止揮發(fā),配置好的提取液4℃保存。
樣本處理:
組織樣品:60℃烘干粉碎,過100目篩,稱約0.01g,加2mL提取液,37℃振蕩提取60min。
測定操作表:
空白管 | 測定管 | |
樣本(μL) | 1000 | |
提取液(μL) | 1000 | |
迅速測定440nm處吸光值A(chǔ),分別記為A空白管和A測定管,△A=A測定管-A空白管 |
注意:空白管只需測定一次。
計算公式:
類胡蘿卜素含量(μg/g)= △A×V樣總÷(ε×d)÷W×1000
= 1.6×△A÷W
V樣總:提取液總體積,2mL;ε:類胡蘿卜素經(jīng)驗吸光系數(shù),2500;d:光徑,0.5cm; W:樣本質(zhì)量,g
注意事項:
1. 提取液易揮發(fā),有毒性,操作時做好防護措施。
2. 測定必須能迅速,防止揮發(fā)造成誤差。
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