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甜菜堿(Betaine)含量試劑盒說明書

發(fā)布時(shí)間:2023/9/1      點(diǎn)擊次數(shù):253

甜菜堿(Betaine)含量試劑盒說明書

                                                  微量法100T/96S

 

 

    意:正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義:

甜菜堿是一種廣泛分布于動(dòng)植物及微生物體內(nèi)的季銨型水溶性生物堿,是生物體內(nèi)膽堿的氧化產(chǎn)物,可以增強(qiáng)免疫力、降血脂、抗氧化、抗腫瘤,并可作為甲基供體,參與促進(jìn)動(dòng)物蛋白質(zhì)和脂肪代謝、增進(jìn)食欲、緩和應(yīng)激、調(diào)節(jié)滲透壓、穩(wěn)定維生素等多種生物作用,在化工、醫(yī)藥、食品添加劑等領(lǐng)域有較廣泛的應(yīng)用。

 

測定原理:

甜菜堿在強(qiáng)酸條件下和雷氏鹽發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生沉淀,沉淀用丙酮溶解形成紅色溶液,在525nm處有特征吸收峰,測定525nm處的吸光值,可計(jì)算得樣品的甜菜堿含量。

 

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

天平、離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96孔板、yi醚、鹽酸、丙酮和蒸餾水。

 

試劑組成和配制:

提取液:液體30mL×1 ,4保存;

試劑一:粉劑×3瓶,4℃保存;臨用前根據(jù)用量配制,每瓶加20mL蒸餾水溶解,加390μL濃鹽酸調(diào)pH1。

試劑二:99%yi醚,自備。取無水yi醚59.4mL,加入蒸餾水0.6mL,混勻。

試劑三:70%丙酮,自備。(易揮發(fā),根據(jù)用量自備,丙酮:蒸餾水=7:3)。

 

甜菜堿提?。?/span>

取烘干后過40目篩的樣品約0.02g,加0.8mL水,置于60℃提取30min,期間不斷震蕩。再加入200µL提取液,混勻后10000g,25℃,離心10min,取上清液。

 

測定操作表:

1、   酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長至525nm。

2、   操作表


空白管

測定管

上清液(µL


300

蒸餾水(µL

300


試劑一(µL

500

500

充分混勻,4℃中反應(yīng)2h,12000rpm25℃,離心10min,棄上清

試劑二(µL

500

500

混勻,12000rpm,25℃,離心10min,棄上清。置于通風(fēng)櫥使殘余yi醚自然揮發(fā)干凈  

試劑三(µL

300

300

震蕩使沉淀充分溶解,取200µL96孔板,記錄標(biāo)準(zhǔn)管和測定管525nm處吸光值A測定與A空白。ΔA=A測定管-A空白管。

 

甜菜堿含量計(jì)算公式:

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.502x + 0.0057,R2 = 0.9993;x為甜菜堿濃度(mg/mL),y為吸光值。

甜菜堿含量(mg/g 干重)=ΔA-0.0057÷ 0.502× V標(biāo)準(zhǔn)÷(V÷V樣總×W)

                  =1.99×ΔA-0.0057÷W

V標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)品體積,0.3mL;V樣:反應(yīng)中樣本體積,0.3mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;W:樣本質(zhì)量,g

 

注意事項(xiàng):

1、   試劑一配制時(shí)pH嚴(yán)格控制為1,否則會(huì)導(dǎo)致反應(yīng)不wan全,配制后4℃只能穩(wěn)定幾個(gè)小時(shí),配制后盡快使用。

2、   試劑二與試劑三對(duì)呼吸道有一定的刺激,請(qǐng)做好防護(hù)工作。



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