植物硝態(tài)氮試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
硝態(tài)氮是植物最主要的氮源。植物體內(nèi)硝態(tài)氮含量反映了土壤中硝態(tài)氮的供應(yīng)情況,可作為土壤氮肥的指標(biāo)。測定植物體內(nèi)的硝態(tài)氮含量,不僅能夠反映出植物的氮素營養(yǎng)情況,而且對鑒定蔬菜和以植物為原料的加工制品的品質(zhì)也有重要的意義。
測定原理:
在濃酸條件下,NO3-與水楊酸反應(yīng),生成硝基水楊酸,硝基水楊酸在堿性條件下(PH>12)呈黃色,在一定范圍內(nèi),其顏色深淺與含量成正比,可比色測定計(jì)算得硝態(tài)氮含量。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
蒸餾水、天平、常溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制:
試劑一:粉劑×2支,4℃避光保存。臨用前根據(jù)用量每瓶加1.2mL濃硫酸充分溶解。
試劑二:液體60mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1支,4℃保存。
樣本處理:
按照質(zhì)量(g):蒸餾水體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL蒸餾水)加入蒸餾水,室溫勻漿后置于90℃恒溫水浴鍋中浸提30min,期間不斷晃動或者置于90℃恒溫?fù)u床中振蕩提取30min,待冷卻后于25℃,12000g離心15min,取上清待測。(深色植物勻漿后加入約3mg試劑三后再提取)
測定操作表:
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長至410nm,蒸餾水調(diào)零。
1、 在EP管中如下表加樣
空白管 | 測定管 | |
樣本(μL) | 10 | |
蒸餾水(μL) | 10 | |
試劑一(μL) | 20 | 20 |
充分混勻,25℃靜置30min | ||
試劑二(μL) | 475 | 475 |
混勻,渦旋振蕩,使出現(xiàn)的沉淀充分溶解,轉(zhuǎn)移200uL至微量石英比色皿/96孔板中測定410nm處吸光值A,△A=A測定管-A空白管 |
注意:空白管只需測定一次。
計(jì)算公式:
a. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y=0.0156x+0.0073,R2=0.9997
NO3—— N含量(mg/kg鮮重)=(△A-0.0073)÷ 0.0156÷(W÷V樣總)
=64.1×(△A-0.0073)÷W
V樣總:加入提取液體積,1mL,W:樣本質(zhì)量,g
a. 用96孔板測定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y=0.0078x+0.0073,R2=0.9997
NO3—— N(mg/kg鮮重)=(△A-0.0073)÷ 0.0078÷(W÷V樣總)
=128.2×(△A-0.0073)÷W
V樣總:加入提取液體積,1mL,W:樣本質(zhì)量,g
注意事項(xiàng):
1. 試劑一配制好后盡快使用,4℃可保存一周。
2. 試劑一和試劑二均具有強(qiáng)腐蝕性,操作時(shí)需做好防護(hù)措施。
3. Z低檢出限為2μg/g。
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