植物銨態(tài)氮試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
氮素是構(gòu)成生物體的一種必需元素,自然界中的氮素循環(huán)包括許多轉(zhuǎn)化作用??諝庵械牡?dú)獗还痰⑸锛爸参锱c微生物的共生體固定成氨態(tài)氮,經(jīng)過硝化微生物的作用轉(zhuǎn)化成硝態(tài)氮,后者被植物或微生物同化成有機(jī)氮化物,植物組織氨氮含量可反映植物受脅迫的程度。
測(cè)定原理:
α-氨基酸與水合茚三酮溶液一起加熱,經(jīng)氧化脫氨變成相應(yīng)的α-酮酸,酮酸進(jìn)一步脫羧變成醛,水合茚三酮?jiǎng)t被還原,在弱酸環(huán)境中,還原型茚三酮,氨和另一分子水合茚三酮反應(yīng), 縮合生成藍(lán)紫色物質(zhì),在580nm處有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、研缽、常溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體9mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加1.5mL蒸餾水充分溶解。
試劑三:液體15mL×1瓶,4℃保存。
樣本處理:
按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,室溫勻漿后于25℃,12000g離心10min,取上清待測(cè)。
測(cè)定操作表:
空白管 | 測(cè)定管 | |
樣本(μL) | 60 | |
蒸餾水(μL) | 60 | |
試劑一(μL) | 90 | 90 |
試劑二(μL) | 15 | 15 |
充分混勻,沸水浴5min后自然冷卻10min | ||
試劑三(μL) | 150 | 150 |
充分混勻,取200μL于微量石英比色皿/96孔板中測(cè)定580nm處吸光值A,△A=A測(cè)定管-A空白管 |
注意:空白管只需測(cè)定一次。
計(jì)算公式:
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y=0.1535x-0.0279,R2=0.9993
NH4+—N含量(μg/g 鮮重)=(△A+0.0279)÷ 0.1535×V反總÷(W×V樣÷V樣總)
= 32.9×(△A+0.0279)÷W
V反總:反應(yīng)總體積,0.315mL;V樣:反應(yīng)體系中加入樣本體積,0.06mL;V樣總:加入提取液體積,1mL,W:樣本質(zhì)量,g
a. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y=0.0768x-0.0279,R2=0.9993
NH4+—N含量(μg/g 鮮重)=(△A+0.0279)÷ 0.0768×V反總÷(W×V樣÷V樣總)
= 65.8×(△A+0.0279)÷W
V反總:反應(yīng)總體積,0.315mL;V樣:反應(yīng)體系中加入樣本體積,0.06mL;V樣總:加入提取液體積,1mL,W:樣本質(zhì)量,g
注意事項(xiàng):
1. 提取好的待測(cè)液盡快測(cè)定,低溫保存不得超過24小時(shí)。
2. 沸水浴時(shí)間不宜過長(zhǎng),否則會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響。
3. 顯色后20min內(nèi)完成測(cè)定。
4. Z低檢出限為18μg/g。
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