乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶（ChAT）測試盒說明書

(測組織)

一、測定原理：

乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶(choline acetyltransferase    ChAT)的測定是以乙酰輔酶 A 和膽堿為底物，在 ChAT 的作用下，反應(yīng)的生成物和顯色劑結(jié)合，在 324nm 處測定吸光度，以此計算 ChAT 的活力。

二、試劑組成與配制(40 管/20 樣)：

試劑一：液體 6mL×1 瓶，4℃保存。室溫低時會有結(jié)晶析出，測試前 37℃水浴至澄清。

試劑二：粉劑×1 支，臨用前加 220μL 的蒸餾水，充分溶解；用不完的試劑-20℃以下保存。

試劑三：粉劑×1 支，臨用時每支加雙蒸水 440μL，用不完的試劑-20℃以下保存。

試劑四：液體×1 支，臨用前每支用雙蒸水 1:1 稀釋，4℃保存。

試劑五：液體×1 支，4℃保存。

試劑六：液體×1 支，4℃保存。試劑七：液體×1 支，4℃保存。

三、操作步驟：

1、樣本前處理：

10%勻漿液的制備：準確稱取組織重量，按重量（g）：體積(mL)=1：9 的比例，加入 9 倍體積的生理鹽水，2500 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，取上清液，再用生理鹽水 2 倍稀釋后測定；

2、操作表：

四、測定意義:

乙酰膽堿 Ach 是調(diào)節(jié)食道平滑肌運動的主要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)。食道平滑肌收縮主要是由于 Ach 釋放引起。而乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶(Choline acetyltransferase ChAT)和乙酰膽堿脂酶(Acetylcholinesterase ACHE)分別是

Ach 的合成酶和水解酶，調(diào)節(jié) Ach 的代謝。食道組織中這兩個酶的活力代表了食管內(nèi)源性膽堿能神經(jīng)功能狀態(tài)。

乙酰膽堿是延髓脊髓運動神經(jīng)元，自主神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)節(jié)前纖維，神經(jīng)節(jié)后膽堿能(副交感神經(jīng))纖維，以   及中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)許多神經(jīng)元(例如基底節(jié)，大腦運動區(qū)皮層)的主要神經(jīng)遞質(zhì)。它是通過膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶的   作用，由膽堿與來自線粒體的乙酰輔酶 A 所合成。在獲得釋放后，乙酰膽堿刺激特殊的膽堿能受體，這種相互作用很快被局部的膽堿酯酶所終止，后者使乙酰膽堿被水解為膽堿與乙酸鹽。乙酰膽堿的水平由膽堿乙   酰轉(zhuǎn)移酶和膽堿的攝取所調(diào)控。